HiMedia MV1145-100G Основа HiVeg среды Листерия Оксфорд

Основа питательной среды HiMedia MV1145-100G Основа HiVeg среды Листерия Оксфорд — порошкообразный компонент для селективного выделения и идентификации видов Listeria. Применяется для анализа клинических, пищевых и молочных образцов; 27,75 г основы растворяют в 500 мл очищенной или дистиллированной воды и дополняют селективной добавкой.

Назначение

Рекомендуется для селективного выделения и идентификации видов Listeria из клинических образцов, пищевых продуктов, молока и молочных продуктов, а также проб объектов окружающей среды.

Типы образцов

• Клинические образцы: ткани или биологические жидкости.
• Пищевые и молочные образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связывают с заболеваниями животных. Все виды Listeria могут быть патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительная диагностика листериоза возможна только при выделении и культивировании ответственных бактерий из образцов крови или спинномозговой жидкости поражённых организмов.

Основа среды «Листерия Оксфорд» разработана на основе состава, описанного Curtis и соавторами, для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых образцов. Основа среды «Листерия Оксфорд HiVeg®» содержит растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

• Специальный пептон HiVeg® служит источником необходимых питательных веществ для микроорганизмов.
• Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты.
• Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов; отдельные штаммы стафилококков могут расти в виде колоний, отрицательных по гидролизу эскулина.
• Циклогексимид снижает грибковую контаминацию.
• Цефотетан и фосфомицин подавляют избыточный рост бактерий.
• Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, не относящиеся к видам Listeria.
• В качестве альтернативы можно добавлять моксалактам (FD126), подавляющий как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.
• L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы.
• Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако рекомендуется предварительно разводить инокулят; дополнительное разведение особенно необходимо при высокой загрязнённости образца. Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех типов образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (ориентировочно 0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или одного флакона селективной добавки CM Selective Supplement (FD126).
6. Тщательно перемешайте среду перед разливом в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и методики выделения

Клинические, фекальные и биологические образцы

1. Гомогенизируйте образец в 0,1%-ной пептонной воде HiVeg® (MV028).
2. Внесите 0,1 мл подготовленного образца непосредственно на селективную среду для Listeria либо в селективный бульон обогащения.
3. При использовании селективного бульона инкубируйте посев при 30 °C в течение 7 суток.
4. Перенесите обогащённую культуру на селективную среду для Listeria.
5. Инкубируйте посев согласно применяемой методике выделения.

Пищевые и молочные образцы

Для выделения Listeria из пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты:

1. Внесите 25 мл или 25 г образца в 225 мл бульона обогащения Listeria UVM (MV890A).
2. Гомогенизируйте образец и тщательно перемешайте.
3. Инкубируйте в течение 48 ч при 30 °C.
4. Выполните штриховой посев обогащённой культуры на среду «Листерия Оксфорд».
5. Инкубируйте аэробно в течение 48 ч при 37 °C.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по гидролизу эскулина.
7. Пересевайте отобранные колонии на соевый агар HiVeg® (MV290).
8. Инкубируйте в течение 24 ч.
9. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения.

Для пищевых и экологических образцов обычно применяется селективное обогащение.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV1145-100G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Тип продукта: HiVeg™
• Материал упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Прочный гель, сопоставимый с гелем 1,0%-ного агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубым оттенком.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 5,55 % при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют с добавлением селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или CM Selective Supplement (FD126) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.