HiMedia MV1139-500G Модифицированная основа MYP HiVeg агара

Основа питательной среды HiMedia MV1139-500G Модифицированная основа MYP HiVeg агара предназначена для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков. Среда дифференцирует микроорганизмы по лецитиназной активности, ферментации маннита и устойчивости к полимиксину после добавления селективной добавки FD003 и эмульсии яичного желтка FD045.

Назначение и область применения

Модифицированная основа MYP HiVeg агара применяется для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков.

Типы образцов:

• пищевые продукты;
• вода.

Среда предназначена для дифференциации Bacillus cereus от других бактерий по лецитиназной активности, ферментации маннита и устойчивости к полимиксину. Колонии подозрительных микроорганизмов рекомендуется переносить на свежую среду для визуализации истинной реакции, поскольку кислота, образуемая организмами, отличными от Bacillus cereus, может диффундировать через среду и затруднять различение ферментирующих и неферментирующих маннит штаммов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® № 1 служат источниками азота и углерода, длинноцепочечных аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ. Растительные пептоны используются вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не связана с рисками BSE/TSE.

Принцип действия и интерпретация результатов

Bacillus cereus широко распространён в почве, растительности, воде и пыли. Микроорганизм выделяют из большого количества пищевых продуктов, включая овощи, мясо, зерновые, пастеризованное свежее и сухое молоко, а также переработанные пищевые продукты (1, 2, 3). При благоприятных условиях Bacillus cereus размножается и вызывает желудочно-кишечные заболевания (3).

Bacillus cereus связан с двумя различными формами пищевого отравления:

• рвотной формой;
• диарейной формой.

Рвотная форма обусловлена высокостабильным токсином, сохраняющим активность при высокой температуре, воздействии трипсина, пепсина и экстремальных значений pH. Диарейная форма обусловлена энтеротоксином, чувствительным к воздействию тепла и кислот.

Лецитиназная активность является ключевой реакцией для дифференциальной идентификации Bacillus cereus — наиболее часто встречающегося и клинически значимого вида — от большинства других видов Bacillus. При наличии лецитиназной активности у неизвестного изолята предварительную идентификацию Bacillus cereus проводят также по морфологии колоний, гемолитической реакции и результатам тестов на подвижность.

При высокой концентрации в некоторых пищевых продуктах Bacillus cereus может образовывать метаболиты, вызывающие клинические симптомы пищевого отравления (4). Модифицированный агар MYP имеет состав, аналогичный агару MYP, за исключением концентрации агара. Комитет ISO рекомендовал модифицированный агар MYP для выявления стафилококков и бацилл (7).

Ферментацию маннита выявляют по феноловому красному: в результате образования кислоты колонии, ферментирующие маннит, приобретают жёлтую окраску. Добавленная эмульсия яичного желтка позволяет дифференцировать колонии, продуцирующие лецитиназу; такие колонии окружены зоной белого преципитата.

Добавление сульфата полимиксина B (FD003) ограничивает рост грамотрицательных бактерий, таких как Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa. Модифицированная дифференцирующая среда MYP HiVeg® позволяет отличать Bacillus cereus от других видов Bacillus по неспособности ферментировать маннит и слабому спорообразованию.

Bacillus cereus расщепляет компоненты яичного желтка и образует типичные колонии бациллярной формы с красными зонами и белыми ореолами.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 43,02 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое 2 флаконов стерильного раствора селективной добавки PolyB FD003 до конечной концентрации 100 ед./мл.
6. Добавьте 100 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045 на 1000 мл среды.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам (6).

Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным стандартам (8).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Дополнительная идентификация культур

Колонии, полученные на модифицированной основе MYP агара, пересеивают на питательный агар и инкубируют при 30 °C в течение 24 ч. Это позволяет наблюдать или определять вегетативные клетки, спорангии, морфологию спор и липидные глобулы внутри вегетативных клеток.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 32 °C в течение 18–40 ч на среде с добавленными эмульсией яичного желтка FD045 и сульфатом полимиксина B FD003.

* Соответствующие номера WDCM.

** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Технические характеристики

• Наименование: модифицированная основа MYP HiVeg® агара
• Артикул: MV1139-500G
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Масса: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,90–7,30
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий, не содержащий комков порошок от светло-жёлтого до розовато-фиолетового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка FD045: в чашках Петри образуется непрозрачный гель светло-оранжевого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,3 % масс./об. при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

pH

pH: 6,90–7,30.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C.

Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке. После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности продукта. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования плотно закрывайте контейнер. Эффективность продукта обеспечивается при использовании в течение указанного срока годности.

Предупреждения и меры предосторожности

Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную