HiMedia MV112-500G Основа мочевинного HiVeg агара (Кристенсен)

Основа мочевинного HiVeg агара (Кристенсен) HiMedia MV112-500G для выявления продукции уреазы. Рекомендуется для идентификации микроорганизмов рода Proteus и других представителей семейства Enterobacteriaceae; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

Среда используется для определения способности микроорганизмов вырабатывать фермент уреазу. В основе лежит метод Кристенсена, который позволяет обнаруживать активность уреазы у быстроположительных организмов Proteus, а также у других представителей Enterobacteriaceae с замедленной реакцией.

Для повышения чувствительности метода в состав среды внесены следующие изменения:

1. Добавление глюкозы.
2. Снижение концентрации пептона.
3. Ослабление буферной системы, что позволяет обнаруживать даже минимальное количество щелочи.

В данной модификации (HiVeg®) животные пептоны полностью заменены растительными для исключения рисков BSE/TSE (губчатой энцефалопатии).

Функции компонентов:

• Растительный пептон HiVeg®: источник основных питательных веществ.
• Декстроза (глюкоза): источник энергии.
• Хлорид натрия: поддержание осмотического равновесия.
• Фосфаты: буферизация среды.
• Мочевина: подвергается гидролизу с высвобождением аммиака.
• Феноловый красный: индикатор, фиксирующий повышение щелочности (изменение цвета с оранжевого на розовый).

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Растворите 24,01 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа) в течение 20 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 50 мл стерильного 40 % раствора мочевины (артикул FD048) и тщательно перемешайте.
6. Разлейте по стерильным пробиркам и оставьте до застывания в скошенном положении.

Важно: Не перегревайте и не повторно нагревайте среду, так как мочевина легко разлагается.

Процедура анализа

В качестве образца используются изолированные микроорганизмы из проб. Для проб пищевых продуктов, молочных продуктов и воды следует использовать соответствующие методы сбора и обработки согласно отраслевым стандартам.

Интерпретация результатов и ограничения

Оценка результатов

Положительная реакция характеризуется изменением цвета среды с оранжевого на розовый (вишневый) вследствие образования щелочи при гидролизе мочевины.

Ограничения метода

• Длительная инкубация может привести к спонтанной щелочной реакции в среде.
• Среды на основе мочевины не являются специфичными для определения абсолютной скорости активности уреазы, так как основаны на общем образовании щелочи.
• Гидролиз белков может повысить pH среды до щелочного значения из-за высвобождения избытка аминокислот, что приводит к ложноположительным результатам.
• Для исключения ложноположительных результатов рекомендуется использовать отрицательный контроль (среду без мочевины).

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические показатели

• Внешний вид: светло-желтый или светло-розовый однородный сыпучий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: желто-оранжевый прозрачный или слегка опалесцирующий гель (в пробирках со скосом).
• Реакция 2,4 % водного раствора (при 25 °C): pH 6,8 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после добавления стерильного 40 % раствора мочевины (FD048) и инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

*Соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты должны быть подвергнуты стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.