HiMedia MV1106-500G M-Endo HiVeg агар LES

Селективная питательная среда HiMedia MV1106-500G M-Endo HiVeg агар LES на растительной основе для количественного определения колиформ в воде. Применяется в двухэтапном методе мембранной фильтрации; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

M-Endo HiVeg® Agar LES является модификацией среды M-Endo Agar LES (Lawrence, Experimental Station), разработанной по методике McCarthy, Delaney и Grasso. Среда создана путем полной замены пептонов животного происхождения на растительные, что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией).

Принцип дифференциации основан на способности микроорганизмов ферментировать лактозу:

• Колиформы: ферментируют лактозу, образуя красные колонии и окрашивая среду в красный цвет. Презумптивные колиформы в течение 24 часов образуют золотисто-зеленые колонии с металлическим блеском.
• Неферментирующие лактозу организмы: образуют бесцветные колонии.

Роль компонентов:

• Гидролизаты HiVeg®, пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт: обеспечивают необходимые азотистые питательные вещества.
• Лактоза: ферментируемый углевод.
• Сульфит натрия, синтетический детергент № III и основной фуксин: подавляют рост грамположительных организмов.
• Фосфаты: поддерживают стабильный pH среды.

Методика проведения анализа

Для получения максимального восстановления колиформ рекомендуется двухэтапный процесс обогащения, создающий нетоксичную среду.

Варианты подготовки мембранного фильтра:

1. Первый этап: фильтр-пад пропитывают бульоном Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080). Мембранный фильтр, через который пропущен образец воды, асептически помещают на пад и инкубируют 2 часа при 35 °C в увлажненной атмосфере без переворачивания. После этого фильтр переносят на чашку с M-Endo HiVeg® Agar LES.
2. Альтернативный метод: мембранный фильтр помещают под крышку чашки с M-Endo HiVeg® Agar LES, пропитывают 2 мл бульона Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080) и инкубируют 1–1,5 часа при 35 °C.

Второй этап и инкубация:

Подготовленный мембранный фильтр помещают непосредственно на поверхность агара и инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.

Расчет плотности колиформ:

Результаты учитываются в единицах «общее число колиформ / 100 мл». Экстраполяция проводится по фильтрам, содержащим от 20 до 80 колоний колиформ (но не более 200 колоний всех типов на одну мембрану).

Формула расчета: $\text{Общее число колиформ} = \frac{\text{количество колоний колиформ} \times 100}{\text{объем отфильтрованного образца (мл)}}$

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 51 г порошка в 980 мл дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов. ВНИМАНИЕ: НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
3. Охладить до 45 °C и асептически добавить 20 мл 95% этанола.
4. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. Для больших чашек использовать объем, обеспечивающий толщину слоя 1,5 мм.
5. Важно: не подвергать чашки воздействию прямых солнечных лучей.

Меры предосторожности: основной фуксин является потенциальным канцерогеном; следует избегать вдыхания порошка и попадания на кожу.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Сравнение компонентов (растительная vs животная основа)

Общие параметры

• Концентрация при приготовлении: 51,0 г/л
• Объем готовой среды из 500 г: 9,80 л
• Значение pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2
• Добавка: 95% этанол
• Температура хранения: до 30 °C (сухая среда)
• Срок годности: использовать свежеприготовленную среду

Контроль качества

• Внешний вид порошка: однородный свободнотекучий порошок от светло-пурпурного до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется красный, слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,2 ± 0,2 при 25 °C для 5,1% (масса/объем) водного раствора с 2% (объем/объем) этанолом.

Культуральные характеристики

Характеристики определены после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 часов.