HiMedia MV1106-500G M-Endo HiVeg агар LES

Питательная микробиологическая среда HiMedia MV1106-500G M-Endo HiVeg агар LES — сухой агар для определения общего количества колиформных бактерий в воде, с нормой восстановления 51,0 г/л. Среда применяется в двухэтапном мембранно-фильтрационном методе и требует стерилизации кипячением без автоклавирования.

Назначение

M-Endo HiVeg агар LES предназначен для количественного определения колиформных бактерий в воде двухэтапным методом мембранной фильтрации. Растительные пептоны заменяют пептоны животного происхождения; готовая среда не содержит компонентов животного происхождения и не связана с рисками BSE/TSE.

Состав

Состав на 1 л:

Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Профиль продукта

Технические характеристики

• Тип продукта: агар
• Артикул: MV1106-500G
• Производитель: HiMedia
• Масса упаковки: 500 г
• Норма восстановления: 51,0 г/л
• Объём среды из упаковки 500 г: 9,80 л
• Объём среды из упаковки 100 г: 1,96 л
• pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Дополнительный компонент: этанол 95 %
• Стерилизация: кипячение
• Автоклавирование: не допускается
• Условия хранения: сухая среда при температуре ниже 30 °C
• Использование: применять свежеприготовленную среду
• Температура хранения по данным каталога: 10–30 °C

Принцип действия и интерпретация результатов

M-Endo HiVeg агар LES представляет собой модификацию среды M-Endo Agar LES, разработанной на экспериментальной станции Лоуренса и сформулированной в соответствии с рецептурой Маккарти, Делани и Грассо. Среда предназначена для количественного определения колиформных бактерий в воде.

В отличие от многотрубочного метода наиболее вероятного числа (MPN), мембранно-фильтрационный метод подсчёта колиформных бактерий позволяет проводить определение с более высокой воспроизводимостью и точностью. Для обогащения предложен двухэтапный процесс, обеспечивающий нетоксичные условия для максимального восстановления колиформных бактерий.

Среда основана на принципе, описанном Эндо, и предназначена для дифференциации бактерий, ферментирующих лактозу, и бактерий, не ферментирующих лактозу:

• гидролизат HiVeg®, гидролизат HiVeg® № 1, пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают колиформные бактерии необходимыми питательными веществами, особенно азотистыми;
• лактоза является ферментируемым углеводом;
• сульфит натрия, синтетическое моющее средство № III и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов;
• фосфаты выполняют буферную функцию;
• колиформные бактерии ферментируют лактозу и образуют красные колонии; среда также приобретает сходное окрашивание;
• бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.

Предположительно колиформные бактерии формируют золотисто-зелёные колонии с металлическим блеском в течение 24 ч инкубации. При слишком высокой посевной нагрузке металлический блеск подавляется. В отдельных случаях микроорганизмы, не относящиеся к колиформным, могут образовывать типичные колонии с металлическим блеском, а колиформные бактерии — атипичные колонии тёмно-красного цвета без блеска.

Методика проведения анализа

1. На первом этапе обогащения пропитайте фильтровальную прокладку бульоном Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080).
2. Мембранный фильтр, через который пропущена проба воды, асептически поместите на пропитанную прокладку.
3. Инкубируйте мембранный фильтр без переворачивания в течение 2 ч при 35 °C во влажной атмосфере.
4. После инкубации асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с M-Endo HiVeg агаром LES.
5. Инкубируйте чашку при 35 °C в течение 24 ч.
6. Альтернативный вариант первого этапа: поместите мембранную фильтровальную прокладку внутрь крышки чашки Петри с M-Endo агаром LES.
7. Пропитайте прокладку 2 мл бульона Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080).
8. Инкубируйте прокладку в течение 1–1½ ч при 35 °C.
9. На втором этапе поместите подготовленный мембранный фильтр непосредственно на поверхность агара.
10. Инкубируйте фильтр на агаре в условиях, описанных выше: при 35 °C в течение 24 ч.
11. Оцените наличие предположительных колиформных бактерий по золотисто-зелёным колониям с металлическим блеском.

Чашки не следует подвергать воздействию прямых солнечных лучей.

Расчёт плотности колиформных бактерий

Плотность колиформных бактерий выражают как общее количество колиформных бактерий на 100 мл воды.

Для подсчёта используют мембранные фильтры, на которых выявлено 20–80 колоний колиформных бактерий, но общее количество колоний всех типов на одном мембранном фильтре не должно превышать 200.

Формула расчёта:

Общее количество колиформных бактерий, колоний/100 мл = количество колоний колиформных бактерий × 100 / объём профильтрованной пробы, мл

Подготовка среды

1. Суспендируйте 51 г сухой среды в 980 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения, чтобы среда полностью растворилась.
3. Не подвергайте среду автоклавированию.
4. Охладите среду до 45 °C.
5. Асептически добавьте 20 мл этанола концентрацией 95 %.
6. Перемешайте.
7. Разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм.
8. Для чашек большего диаметра используйте объём среды, достаточный для формирования слоя толщиной 1,5 мм.

Чашки с приготовленной средой нельзя подвергать воздействию прямого солнечного света.

Меры предосторожности

Основной фуксин потенциально канцерогенен. Необходимо избегать вдыхания порошка и загрязнения кожи.

Контроль качества

Внешний вид порошка

Порошок светло-фиолетового или фиолетового цвета, однородный, сыпучий, без комков.

Гелеобразование

Образуется плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность

В чашках Петри образуется гель красного цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция 5,1%-ного водного раствора с добавлением 2 % этанола составляет pH 7,2 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч.

| Микроорганизм (ATCC) | Посев