HiMedia MV1106-100G M-Endo HiVeg агар LES

Сухая питательная среда M-Endo HiVeg агар LES HiMedia MV1106-100G для количественного определения колиформ в воде. Применяется в двухэтапном методе мембранной фильтрации; вес упаковки 100 г.

Принцип измерения

M-Endo HiVeg® Agar LES представляет собой модификацию среды M-Endo Agar LES (Lawrence, Experimental Station), разработанную по формуле McCarthy, Delaney и Grasso. Среда предназначена для дифференциации лактозоположительных и лактозоотрицательных микроорганизмов.

В составе среды растительные пептоны (HiVeg® hydrolysate, HiVeg® hydrolysate No.1, HiVeg® peptone) и дрожжевой экстракт обеспечивают необходимые азотистые питательные вещества для роста колиформ. Лактоза служит ферментируемым углеводом. Сульфит натрия, синтетический детергент № III и основной фуксин подавляют рост грамположительных организмов. Фосфаты выполняют роль буферной системы. Колиформы ферментируют лактозу, образуя красные колонии и окрашивая среду в аналогичный цвет; неферментирующие лактозу микроорганизмы образуют бесцветные колонии.

Данная среда полностью основана на растительных компонентах, что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией).

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 51 г порошка в 980 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
3. Охладите до 45 °C и асептически добавьте 20 мл 95% этанола.
4. Перемешайте и разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. Для больших чашек используйте объем, обеспечивающий толщину слоя агара 1,5 мм.
5. ВАЖНО: не подвергайте готовые чашки воздействию прямых солнечных лучей.

Процедура анализа (двухэтапный метод)

1. Первый этап (обогащение): фильтрационный диск пропитывают бульоном Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080). Мембранный фильтр, через который пропущена проба воды, асептически помещают на диск и инкубируют в увлажненной атмосфере при 35 °C в течение 2 часов без переворачивания чашки. Альтернатива: мембранный фильтр помещают под крышку чашки с M-Endo Agar LES, пропитывают 2 мл бульона Lauryl Tryptose HiVeg® (MV080) и инкубируют 1–1,5 часа при 35 °C.
2. Второй этап: подготовленный мембранный фильтр переносят непосредственно на поверхность агара M-Endo HiVeg® Agar LES и инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.

Интерпретация результатов

Предположительные колиформы образуют золотисто-зеленые колонии с металлическим блеском в течение 24 часов инкубации. При слишком высокой плотности посева блеск может быть подавлен. В редких случаях неcoliформные организмы могут давать типичные блестящие колонии, а колиформы — атипичные (темно-красные без блеска).

Расчет плотности колиформ

Результат выражается в общем количестве колиформ на 100 мл пробы. Для подсчета используют фильтры, содержащие от 20 до 80 колоний колиформ (но не более 200 колоний всех типов на один фильтр).

Формула расчета: $\text{Общее число колиформ} = \frac{\text{количество колоний колиформ} \times 100}{\text{объем отфильтрованной пробы (мл)}}$

Технические характеристики

Состав, г/л:

Сравнение растительной и животной основ

Общие параметры

• Концентрация при приготовлении: 51,0 г/л
• Объем готовой среды из 100 г порошка: 1,96 л
• Объем готовой среды из 500 г порошка: 9,80 л
• Значение pH (25 °C): 7,2 ± 0,2
• Добавка: 95% этанол
• Стерилизация: кипячение (автоклавирование запрещено)
• Условия хранения: сухая среда при температуре ниже 30 °C; использовать свежеприготовленную среду

Контроль качества

• Внешний вид порошка: однородный свободнотекучий порошок от светло-пурпурного до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется красный, слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: 5,1% (масс./об.) водный раствор с 2% (об./об.) этанолом имеет pH 7,2 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч.

Меры предосторожности: основной фуксин является потенциальным канцерогеном; следует избегать вдыхания порошка и контакта с кожей.