HiMedia MV1106-100G M-Endo HiVeg агар LES

Питательная агаризованная среда HiMedia MV1106-100G M-Endo HiVeg агар LES с конечным значением pH 7,2 ± 0,2 при 25 °C. Предназначена для количественного определения колиформных бактерий в воде двухступенчатым мембранно-фильтрационным методом; стерилизация выполняется кипячением, автоклавирование запрещено.

Назначение

M-Endo HiVeg агар LES применяется для количественного определения колиформных бактерий в воде методом мембранной фильтрации с двухступенчатым обогащением.

Среда представляет собой растительную модификацию M-Endo агара LES (Lawrence, Experimental Station), составленную по рецептуре McCarthy, Delaney и Grasso (1), и используется для подсчёта колиформных бактерий в воде (2). Мембранно-фильтрационный метод подсчёта колиформных бактерий считается более надёжным и точным по сравнению с многотрубочным тестом наиболее вероятного числа (MPN). Двухступенчатый процесс обогащения обеспечивает нетоксичную среду для максимального восстановления колиформных бактерий. Среда основана на описанной Endo дифференциации ферментирующих и неферментирующих лактозу микроорганизмов (3).

В составе M-Endo HiVeg агара LES животные пептоны полностью заменены растительными пептонами, благодаря чему среда не содержит рисков, связанных с BSE/TSE — губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Профиль продукта

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар
• Форма выпуска: сухая питательная среда
• Масса: 100 г
• Восстановление: 51,0 г/л
• Объём приготовленной среды из упаковки 500 г: 9,80 л
• Объём приготовленной среды из упаковки 100 г: 1,96 л
• Значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Добавка: этанол 95 %
• Стерилизация: кипячение
• Автоклавирование: запрещено
• Температура хранения: 10–30 °C
• Условия хранения: сухую среду хранить при температуре ниже 30 °C; использовать свежеприготовленную среду

Принцип действия и интерпретация результатов

Гидролизат HiVeg®, гидролизат HiVeg® № 1, пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают колиформные бактерии необходимыми питательными веществами, особенно азотистыми соединениями. Лактоза является ферментируемым углеводом.

Сульфит натрия, синтетическое моющее средство № III и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты буферируют среду.

Колиформные бактерии ферментируют лактозу и образуют красные колонии, сопровождаемые аналогичным окрашиванием среды. Неферментирующие лактозу микроорганизмы образуют бесцветные колонии.

Предположительные колиформные бактерии в течение 24 ч инкубации образуют золотисто-зелёные колонии с металлическим блеском. При слишком высокой посевной нагрузке металлический блеск подавляется. В некоторых случаях неколиформные микроорганизмы также могут образовывать типичные колонии с металлическим блеском, а колиформные бактерии — атипичные колонии тёмно-красного цвета без блеска.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 51 г сухой среды в 980 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не подвергайте среду автоклавированию.
4. Охладите среду до 45 °C.
5. В асептических условиях добавьте 20 мл этанола концентрацией 95 %.
6. Перемешайте среду.
7. Разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм.
8. При использовании больших чашек внесите достаточное количество среды для формирования слоя толщиной 1,5 мм.
9. Не подвергайте чашки с приготовленной средой воздействию прямого солнечного света.

Двухступенчатая мембранная фильтрация

1. На первой стадии обогащения пропитайте фильтрующую подложку бульоном с лаурил-триптозой HiVeg® (MV080).
2. Мембранный фильтр, через который пропущена проба воды, асептически поместите на подложку.
3. Инкубируйте фильтр без переворачивания в течение 2 ч при 35 °C во влажной атмосфере.
4. После инкубации асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с M-Endo HiVeg агаром LES.
5. Инкубируйте чашку при 35 °C в течение 24 ч.
6. В качестве альтернативного варианта мембранную фильтрующую подложку можно разместить внутри крышки чашки Петри с M-Endo агаром LES, затем пропитать её 2 мл бульона с лаурил-триптозой HiVeg® (MV080) и инкубировать в течение 1–1,5 ч при 35 °C.
7. На второй стадии поместите подготовленный мембранный фильтр непосредственно на поверхность агара.
8. Инкубируйте фильтр при 35 °C в течение 24 ч, как описано выше.
9. Оцените характер колоний после инкубации. Предположительные колиформные бактерии образуют золотисто-зелёные колонии с металлическим блеском в течение 24 ч.

Расчёт плотности колиформных бактерий

Плотность колиформных бактерий выражают как общее количество колиформных бактерий на 100 мл пробы.

Для расчёта рекомендуется использовать мембранные фильтры, на которых выявлено 20–80 колоний колиформных бактерий, но общее количество колоний всех типов на одном фильтре не превышает 200.

Формула расчёта:

Общее количество колиформных бактерий, колонии/100 мл = количество колоний колиформных бактерий × 100 / объём профильтрованной пробы, мл

Контроль качества

Внешний вид порошка

Порошок от светло-фиолетового до фиолетового цвета, однородный, сыпучий, без комков.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность

В чашках Петри образуется гель красного цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция 5,1 % мас./об.