HiMedia MV1084-500G HiVeg агар Мюллера-Хинтона №2

Обезвоженная питательная среда HiMedia MV1084-500G HiVeg агар Мюллера—Хинтона №2 предназначена для определения чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий к антимикробным препаратам диско-диффузионным методом Бауэра—Кирби и содержит низкие уровни тимина, тимидина, кальция и магния. Агар Мюллера—Хинтона №2 применяют для анализа чистых культур, выделенных из клинических образцов, но среда не рекомендована для требовательных микроорганизмов и требовательных анаэробов.

Назначение

Среда рекомендована для тестирования чувствительности распространённых и быстрорастущих бактерий к антимикробным препаратам с использованием дисков по методу Бауэра—Кирби. Состав стандартизирован по содержанию тимина, тимидина, ионов кальция и магния для обеспечения параметров, необходимых при определении минимальной подавляющей концентрации (МПК).

HiVeg агар Мюллера—Хинтона №2 соответствует агару Мюллера—Хинтона №2, за исключением полной замены пептонов животного происхождения на растительные пептоны HiVeg. Это позволяет избежать рисков, связанных с пептонами животного происхождения, включая риски BSE/TSE.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 38,0 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Цель определения чувствительности — оценить in vitro вероятность успешного лечения инфекции пациента конкретным антимикробным препаратом.

Исходная формула агара Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам. В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Среда предназначена для диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель. Процедура основана на применении диска с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста коррелируют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски, содержащие заданные количества антимикробных препаратов, инкубируют посевы и измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением результатов с критериями CLSI, ISO и EUCAST.

Агар Мюллера—Хинтона выбран CLSI по следующим причинам:

• обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от партии к партии;
• содержит низкие уровни ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддерживает рост большинства нетребовательных патогенных бактерий;
• для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт применения.

Агар Мюллера—Хинтона №2 используют для определения чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Kirby—Bauer рекомендовали эту среду для выполнения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска высокой концентрации. Комитет ВОЗ по стандартизации определения чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Среда разработана с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Среда не рекомендована для требовательных микроорганизмов. Тимин и тимидин ингибируют активность сульфонамидов и триметоприма, а кальций и магний влияют на активность аминогликозидных антибиотиков.

Настой HiVeg® и кислотный гидролизат HiVeg® обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Компоненты отобраны по низкому содержанию тимина и тимидина, определённому по значениям МПК для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT). Концентрации ионов кальция и магния скорректированы для получения количеств, рекомендованных CLSI, и обеспечения корректных значений МПК для аминогликозидов и Pseudomonas aeruginosa.

На результаты диско-диффузионного теста чувствительности влияют:

• глубина слоя агара;
• активность антимикробного диска;
• концентрация инокулюма;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Тип образцов

Клинические образцы: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Отбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулюма может влиять на размер зоны подавления роста. Слишком плотный инокулюм может привести к уменьшению зон, а слишком низкая плотность — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде и могут нуждаться в добавлении крови.
4. Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности выполняют с использованием антибиотических дисков, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может изменить их активность.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами лечения in vivo.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета, формирующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция 3,8%-ного водного раствора при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1.
• pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики и контрольные испытания

Тесты чувствительности к антибиотикам проводят в соответствии с действующим ISO/TS 16782 с соблюдением установленных пределов приемки. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест чувствительности к антибиотикам

Для стандартных штаммов ATCC испытывают различные диски и измеряют зоны подавления роста после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Зоны для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.