HiMedia MV1064-100G Основа HiVeg агара для идентификации листерий

Основа питательной среды HiMedia MV1064-100G Основа HiVeg агара для идентификации листерий предназначена для селективного выделения и идентификации видов Listeria. Используется при анализе пищевых продуктов и воды, при этом для видовой идентификации Listeria требуются дополнительные биохимические тесты.

Назначение

Основа HiVeg агара для идентификации листерий рекомендована для селективного выделения и идентификации видов Listeria из пищевых продуктов и образцов воды.

Среда также известна как агар PALCAM — полимиксин-акрифлавин-хлорид лития-цефтазидим-эскулин-маннитоловый агар. Среда PALCAM разработана для выделения L. monocytogenes из пищевых продуктов.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 69,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое 2 флаконов селективной добавки для Listeria PALCAM (FD061).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Род Listeria включает следующие виды:

• Listeria monocytogenes;
• Listeria ivanovii;
• Listeria seeligeri;
• Listeria welshimerii;
• Listeria innocua;
• Listeria grayi;
• Listeria murrayi;
• Listeria denitrificans.

С заболеваниями человека связаны L. monocytogenes и L. ivanovii. Патогенность L. ivanovii остаётся неопределённой.

L. monocytogenes встречается в различных средах обитания, включая нормальную микрофлору здоровых жвачных животных, желудочно-кишечный тракт людей без симптомов заболевания, а также речную воду, сточные воды, почву, силос, удобрения и разлагающуюся растительность.

Среда PALCAM обладает высокой селективностью благодаря присутствию хлорида лития, цефтазидима, полимиксина B и гидрохлорида акрифлавина.

Дифференциально-диагностические свойства среды основаны на двух индикаторных системах:

• эскулин и цитрат железа;
• маннитол и феноловый красный.

Основа агара HiVeg® для идентификации Listeria PALCAM соответствует основе агара PALCAM для идентификации Listeria, за исключением состава пептона: пептоны животного происхождения полностью заменены растительными пептонами для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Пептон HiVeg® служит источником углерода, азотистых веществ, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых питательных веществ для роста микроорганизмов. Декстроза (глюкоза), крахмал и маннитол являются источниками углеводов и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Феноловый красный используется как индикатор pH и изменяет окраску при изменении кислотности среды.

L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом аммонийного железа с образованием коричнево-чёрного комплекса, который проявляется в виде чёрного ореола вокруг колоний.

L. monocytogenes не ферментирует маннитол. Загрязняющие микроорганизмы, такие как Enterococci и Staphylococci, ферментируют маннитол; это проявляется изменением цвета среды с красного на жёлтый.

В условиях микроаэрофильной инкубации строгие аэробы, включая виды Bacillus и Pseudomonas, подавляются.

Добавление яичного желтка в концентрации 2,5 % об./об. в агар PALCAM может способствовать восстановлению повреждённых клеток.

Среда, содержащая кровь и нанесённая поверх агара PALCAM, позволяет дифференцировать и подсчитывать гемолитические виды Listeria.

В зависимости от типа образца перед посевом на агар PALCAM HiVeg® следует использовать селективный обогатительный бульон:

• для молочных продуктов обычно используют селективную обогатительную среду для Listeria;
• для мяса и птицы используют основу селективной обогатительной среды HiVeg® для Listeria UVM (MV890A);
• для мяса и птицы также используют основу вторичного обогатительного бульона HiVeg® Fraser (MV1083).

На агаре PALCAM HiVeg® колонии Listeria после посева и инкубации при 35 °C в течение 24–48 ч в аэробных или микроаэрофильных условиях имеют серо-зелёную окраску с чёрным осадком.

Тип образца

• Образцы пищевых продуктов.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным рекомендациям.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным рекомендациям и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

Среда не является дифференциальной для окончательной видовой идентификации, поэтому для различения видов Listeria требуются дополнительные биохимические тесты.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, предусмотренные установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 6,9 % при 25 °C.

• pH: 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в микроаэрофильных условиях с добавлением селективной добавки PALCAM (FD061) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.