HiMedia MV078-500G Железный HiVeg агар Клиглера

Дифференциально-диагностическая питательная среда HiMedia MV078-500G Железный HiVeg агар Клиглера — порошковый агар для идентификации грамотрицательных энтеробактерий по ферментации глюкозы, лактозы и образованию H₂S. Применяется для анализа выделенных микроорганизмов из пищевых продуктов, молочных продуктов и воды; для получения корректных результатов используют чистые изоляты и учитывают реакции через 18–24 ч.

Назначение

Среда рекомендована для дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных палочек из различных образцов по ферментации глюкозы (декстрозы), лактозы и образованию сероводорода (H₂S).

Тип образца: выделенные микроорганизмы из пищевых продуктов, молочных продуктов и воды.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Принцип дифференциации и интерпретация

Железный агар Клиглера сочетает среду с ацетатом свинца, описанную Клиглером, и агар Рассела с двумя сахарами. Среда используется для дифференциации тифозных, дизентерийных и родственных им палочек. В качестве индикатора pH феноловый красный заменяет ранее применявшийся индикатор Андраде.

В железном агаре Клиглера HiVeg® пептоны животного происхождения полностью заменены растительными пептонами для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Среда позволяет:

• отличать ферментирующие лактозу микроорганизмы от неферментирующих;
• дифференцировать Salmonella Typhi от других представителей рода Salmonella;
• дифференцировать Salmonella Paratyphi A от Salmonella Schottmuelleri и Salmonella Enteritidis;
• выявлять образование газа и H₂S.

В состав среды, помимо специального пептона HiVeg®, экстракта HiVeg®, пептона HiVeg® № 3 и дрожжевого экстракта, входят лактоза и глюкоза (декстроза), что обеспечивает дифференциацию видов кишечных палочек.

Феноловый красный служит индикатором pH и изменяет цвет в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров. Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, изменяющей окраску индикатора с красной на жёлтую. Поскольку декстрозы в среде немного, образование кислоты ограничено; на поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, поэтому его окраска остаётся красной.

При ферментации лактозы образуется большое количество кислоты, препятствующее повторному окислению индикатора, поэтому вся среда окрашивается в жёлтый цвет.

Сочетание сульфата железа и тиосульфата натрия обеспечивает выявление образования сероводорода. Образование H₂S проявляется почернением всей столбиковой части среды либо появлением чёрного кольца в верхней части столбика.

Неферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально образуют жёлтую скошенную часть из-за кислоты, выделяемой при ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После расходования глюкозы в аэробной среде скошенной части реакция становится щелочной вследствие окисления образовавшихся кислот, и скошенная часть приобретает красный цвет. В анаэробной среде столбиковой части обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Ферментирующие лактозу микроорганизмы образуют жёлтые скошенную и столбиковую части, поскольку ферментация лактозы сопровождается образованием большого количества кислот, поддерживающих кислый pH даже в аэробных условиях.

Первоначальная окраска среды в пробирке указывает на отсутствие ферментации как глюкозы (декстрозы), так и лактозы.

Газообразование, или аэрогенная реакция, выявляется по отдельным пузырькам, расслоению или смещению агара, а также по образованию трещин в столбиковой части среды.

Для идентификации на железный агар Клиглера HiVeg® инокулируют чистые культуры предполагаемых микроорганизмов, выделенные на таких средах, как агар МакКонки HiVeg® (MV081), висмут-сульфитный агар HiVeg® (MV027), агар с дезоксихолатом и цитратом HiVeg® (MV065), SS-агар HiVeg® (MV108) и другие среды для выделения.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 57,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки до 45–50 °C в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную часть с длиной столбика около 25,4 мм (1″).

Наилучшие реакции получают на свежеприготовленной среде. Не используйте пробирки и флаконы с завинчивающимися крышками.

Не допускайте перегрева, поскольку он может привести к образованию осадка в среде.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам и местным стандартам.

Для пищевых и молочных продуктов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Результаты следует учитывать через 18–24 ч; более поздняя оценка может привести к ошибочным результатам.
• Для инокуляции необходимо использовать прямую проволочную петлю.
• Для исключения ошибочных результатов следует использовать чистые изоляты.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 5,75 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.