HiMedia MV078-100G Железный HiVeg агар Клиглера

Питательная дифференциальная среда HiMedia MV078-100G Железный HiVeg агар Клиглера предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл по ферментации глюкозы, лактозы и образованию сероводорода. Среда применяется для анализа выделенных микроорганизмов из пищевых продуктов, молока и воды, поставляется в виде порошка массой 100 г и хранится при 10–30 °C.

Назначение

Железный HiVeg агар Клиглера предназначен для дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных бацилл из различных образцов на основании:

• ферментации глюкозы (декстрозы);
• ферментации лактозы;
• образования сероводорода (H₂S);
• образования газа.

Среду используют для идентификации выделенных чистых культур, полученных при посеве на плотные среды, включая агар МакКонки HiVeg (MV081), висмут-сульфитный агар HiVeg (MV027), дезоксихолат-цитратный агар HiVeg (MV065) и агар SS HiVeg (MV108).

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим характеристикам среды.

Принцип дифференциации и интерпретация

Железный агар Клиглера представляет собой комбинацию свинцово-ацетатной среды, описанной Клиглером, и двухсахарного агара Рассела. Среду применяют для дифференциации тифозных, дизентерийных и родственных бацилл.

Феноловый красный используется как индикатор pH вместо ранее применявшегося индикатора Андраде. Индикатор изменяет цвет в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров.

Железный HiVeg агар Клиглера изготовлен с полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Среда дифференцирует бактерии, ферментирующие лактозу, от неферментирующих. Она позволяет отличать Salmonella Typhi от других представителей рода Salmonella, а также Salmonella Paratyphi A от Salmonella Schottmuelleri и Salmonella Enteritidis.

Ферментация глюкозы и лактозы

Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, в результате чего индикатор изменяет цвет с красного на жёлтый. Поскольку содержание декстрозы в среде небольшое, образование кислоты ограничено. На поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, поэтому скошенная часть остаётся красной.

При ферментации лактозы образуется большое количество кислоты, препятствующее повторному окислению индикатора; в результате вся среда становится жёлтой.

Среда содержит лактозу и глюкозу (декстрозу), а также специальный пептон HiVeg®, экстракт HiVeg®, пептон HiVeg® № 3 и дрожжевой экстракт. Такое сочетание компонентов обеспечивает дифференциацию видов кишечных бацилл.

Неферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально образуют жёлтую скошенную часть вследствие ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После исчерпания глюкозы в аэробных условиях скошенной части реакция становится щелочной: скошенная часть приобретает красный цвет вследствие окисления образовавшихся кислот. В анаэробных условиях столбика обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Микроорганизмы, ферментирующие лактозу, образуют жёлтую скошенную часть и жёлтый столбик. Большое количество образующихся кислот поддерживает кислую реакцию среды и в аэробных условиях.

Исходный цвет среды в пробирке указывает на отсутствие ферментации и глюкозы (декстрозы), и лактозы.

Выявление сероводорода и газа

Сочетание сульфата железа и тиосульфата натрия позволяет выявлять образование сероводорода. Образование H₂S определяется по чёрному окрашиванию, возникающему по всему столбику либо в виде кольца в верхней части столбика.

Газообразование, или аэрогенная реакция, выявляют по отдельным пузырькам, расщеплению агара или его смещению вследствие образования трещин в столбике среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 57,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки до 45–50 °C в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную поверхность со столбиком высотой около 1″.

Наиболее достоверные реакции получают на свежеприготовленной среде. Не используйте пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками.

Не допускайте перегрева: перегрев может привести к образованию осадка в среде.

Образцы и пробоподготовка

Тип образца

Выделенные микроорганизмы из пищевых продуктов, молочных продуктов и воды.

Сбор и обращение с образцами

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами и местными нормативными требованиями.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Результаты следует учитывать через 18–24 ч; более поздняя оценка может привести к ошибочным результатам.
• Для инокуляции следует использовать прямую бактериологическую петлю.
• Во избежание ошибочных результатов необходимо использовать чистые изоляты.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция 5,75%-ного водного раствора при 25 °C.

pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.