Микробиологическая питательная среда HiMedia MV072-500G Нитратный HiVeg агар предназначена для выявления восстановления нитратов бактериями. Нитратный HiVeg агар применяется для дифференциации и идентификации микроорганизмов, включая представителей семейства Enterobacteriaceae, при хранении продукта при 10–30 °C.

Назначение

Нитратный HiVeg агар рекомендуется для выявления способности бактерий восстанавливать нитраты.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и не клинических образцов.

Среда применяется для дифференциации и идентификации различных видов бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые микроорганизмы осуществляют денитрификацию — восстановление нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным тестом.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эксплуатационных характеристик.

Происхождение пептонов: без компонентов животного происхождения, растительная основа (Animal Free, Veg).

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный HiVeg агар приготовлен с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Нитратный агар приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной Обществом американских бактериологов в работе по изучению чистых культур бактерий.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Нитриты выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009). Появление красно-фиолетового окрашивания вследствие образования красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не появляется, это означает, что нитрат не восстанавливается либо произошло дальнейшее восстановление до аммиака или газообразного азота. Результат проверяют добавлением щепотки цинковой пыли в пробирку. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания:

• появление красного окрашивания указывает, что нитрат присутствует в среде и ранее не был восстановлен;
• отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает, что нитрат отсутствует и был восстановлен до соединений, находящихся дальше нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, тест на восстановление нитратов подтверждается либо наличием конечного катаболического продукта, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Эта реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитраты, исследование следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть дополнительно восстановлен до азота.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 21 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки до 45–50 °C в наклонном положении.

Методика определения восстановления нитратов

1. Внесите культуру исследуемого микроорганизма в пробирку со средой.
2. Добавьте в пробирку несколько капель каждого реагента: сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009).
3. Отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитратов.
4. Одновременно исследуйте контрольную не инокулированную пробирку.
5. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.

Для оценки культуральных характеристик восстановление нитратов регистрируют после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора α-нафтиламина (R009).

Технические характеристики

• Наименование: Нитратный HiVeg агар
• Артикул: MV072-500G
• Назначение изделия: агар, питательная среда для выявления восстановления нитратов бактериями
• Масса: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: HiVeg™
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 2,1 % при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Значение pH

pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитратов определяют после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора α-нафтиламина (R009).

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее микроорганизм был известен как Enterobacter aerogenes.

Ограничения метода

• Восстановление нитратов не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, грам-реакции, биохимические и серологические тесты.
• Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При проведении теста на восстановление нитратов с α-нафтиламином окрашивание, возникающее при положительной реакции, может быстро исчезать.
• Для быстрорастущих микроорганизмов, активно восстанавливающих нитраты, поздняя постановка реакции может привести к снижению количества нитрита вследствие его дальнейшего восстановления до азота.

Сбор и обращение с образцами

При работе с образцами выделенных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Требования безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.

При работе с образцами и культурами используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При работе с образцами соблюдайте правила надлежащей микробиолог