HiMedia MV072-500G Нитратный HiVeg агар

Сухая питательная среда HiMedia MV072-500G Нитратный HiVeg агар для определения способности бактерий восстанавливать нитраты. Рекомендуется для дифференциации и идентификации различных типов бактерий, в особенности представителей семейства Enterobacteriaceae; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

Нитратный HiVeg агар разработан с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски заражения BSE/TSE (болезнь коровьего губчатого мозга / трансмиссивные губчатые энцефалопатии). Среда приготовлена в соответствии с формулой, опубликованной в «Pure Culture Study of Bacteria» Общества американских бактериологов.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения способности бактерий восстанавливать нитраты. Некоторые бактерии превращают нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот. Присутствие нитритов обнаруживается путем добавления по 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и раствора альфа-нафтиламина (R009). Образование красно-фиолетового цвета (реакция Грисса) вследствие формирования красного диазониевого красителя (п-сульфензобензол-азо-α-нафтиламина) указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание отсутствует, это означает, что нитрат либо не восстанавливался, либо был восстановлен далее до аммиака или азота. Это проверяется добавлением щепотки цинковой пыли:

• Появление красного цвета после добавления цинка указывает на то, что нитрат всё ещё присутствует в среде и не был восстановлен.
• Отсутствие красного цвета после добавления цинка свидетельствует о том, что нитрат отсутствует, следовательно, он был восстановлен далее, чем до стадии нитрита.

Методика проведения анализа

1. Подготовка среды: суспендируйте 21 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды. Нагрейте до кипения для полного растворения.
2. Стерилизация: разлейте среду по пробиркам и стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
3. Формирование скоса: охладите пробирки до 45–50 °C, удерживая их в наклонном положении.
4. Посев: внесите изолированные микроорганизмы из клинических или неклинических образцов.
5. Проведение теста: в пробирку с культурой добавьте по несколько капель сульфаниловой кислоты (R015) и раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).
6. Интерпретация: появление отчетливого красного или розового цвета указывает на восстановление нитрата. Также следует протестировать контрольную (непосеянную) пробирку.
7. Подтверждение: при отсутствии розового цвета добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения полного отсутствия нитрата в среде.

Технические характеристики

Свойства порошка и готовой среды

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель (в пробирках в виде скоса)
• Реакция (pH 2,1 % водного раствора при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Общие параметры

Состав (г/л)

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитрата определяется после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).

*Соответствующие номера WDCM. Примечание: Klebsiella aerogenes ранее была известна как Enterobacter aerogenes.

Ограничения и предостережения

• Тест на восстановление нитратов не является подтверждающим. Полная идентификация бактерий должна включать морфологический анализ, определение реакции по Граму, биохимические и серологические тесты.
• Добавление избытка цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При использовании $\alpha$-нафтиламина цвет положительной реакции может быстро блекнуть.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть для предотвращения образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию в соответствии с правилами работы с инфекционными материалами.