HiMedia MV067-500G Основа HiVeg бульона Дюбо

Основа сухой питательной среды HiVeg бульона Дюбо HiMedia MV067-500G для быстрого культивирования чистых культур Mycobacterium tuberculosis и родственных микроорганизмов. При добавлении соответствующих добавок используется для выращивания микобактерий; состав полностью основан на растительных компонентах (Animal Free) для исключения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения

Бульон Дюбо представляет собой модификацию сред, разработанных Дюбо, Дэвисом и Миддлбруком. В качестве источников азота используются гидролизат HiVeg® и L-аспарагин. Полисорбат 80 (эфир олеиновой кислоты) выполняет роль сурфактанта, обеспечивая необходимые жирные кислоты для репликации микобактерий и способствуя росту за счёт диспергирования бацилл. Фосфаты (в сочетании с хлоридом кальция) служат буферной системой и источником фосфатов. Сульфаты магния, цинка, меди и цитрат аммония железа(III) обеспечивают микроэлементный состав.

Добавляемый в среду альбумин связывает свободные жирные кислоты, которые могут быть токсичны для микобактерий. Альбумин проходит термическую обработку для инактивации липазы, которая в противном случае могла бы высвобождать жирные кислоты из полисорбата 80.

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 1,3 г основы в 180 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. При необходимости нагрейте смесь до полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте к каждому 180 мл основы один из вариантов добавок: 20 мл стерильного бычьего альбумина V, 20 мл стерильной сыворотки или 1 флакон стерильной добавки «Альбумин-Глюкоза» (FD201).

Особенности роста

• При использовании сыворотки рост обычно инициируется при меньших посевных дозах и протекает более обильно, чем при использовании альбумина V.
• Характер роста при обогащении сывороткой более гранулярный, при обогащении альбумином — более диффузный.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-жёлтого до бежевого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.
• Реакция: pH 6,6 $\pm$ 0,2 (для 0,65 % водного раствора с 1 % глицерином при 25 °C).
• Диапазон pH: 6,40–6,80.

Состав (г/л)

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании добавки Albumin Glucose Supplement (FD201), стерильного бычьего альбумина V или стерильной сыворотки после инкубации при 35–37 °C в течение 2–6 недель в атмосфере с 5–10 % CO₂.

Область применения и ограничения

Среда предназначена для общего использования при культивировании микобактерий. Ограничения:

• Может не поддерживать рост крайне привередливых (fastidious) организмов.
• Протеолитические контаминанты могут вызвать локальное или полное переваривание среды.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение основы: в плотно закрытом контейнере при температуре от +10 до +30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом проветриваемом месте, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Работа с культурами микобактерий требует максимальной осторожности, так как они высокоинфекционны.
• Необходимо использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте стандартные правила микробиологической безопасности при работе с клиническими образцами.
• Утилизация: все загрязнённые материалы и остатки среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.