HiMedia MV065-500G Дезоксихолат-цитратный агар, HiVeg

Селективная агаровая питательная среда HiMedia MV065-500G Дезоксихолат-цитратный агар, HiVeg предназначена для выделения кишечных патогенов, прежде всего видов Salmonella и Shigella, из пищевых образцов. Среда применяется для дифференциации лактозосбраживающих и нелактозосбраживающих энтеробактерий, при этом для выделения Shigella рекомендуется менее ингибирующая питательная среда.

Назначение

Дезоксихолат-цитратный агар, HiVeg применяется как селективная среда для выделения кишечных патогенов, особенно видов Salmonella и Shigella, из пищевых образцов.

Для рутинного исследования образцов кала и мочи рекомендуется использовать среду совместно с другими питательными средами, например агаром МакКонки HiVeg (MV082) и висмут-сульфитным агаром HiVeg (MV027).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Технические характеристики

• Тип продукта: HiVeg™
• Назначение изделия: агар
• Физическая форма: порошок
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа; содержит лактозу
• Упаковка: флакон из полиэтилена высокой плотности (HDPE)
• Масса: 500 г
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке

Методика приготовления

1. Суспендируйте 70,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте автоклавированием.
4. Избегайте чрезмерного нагревания, поскольку он ухудшает свойства среды.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Дезоксихолат-цитратный агар приготовлен по модифицированной формуле Лейфсона. Среда предназначена для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых продуктов.

Селективность среды позволяет использовать достаточно большие посевные дозы без риска избыточного роста другой микрофлоры, подавляющей Shigella и Salmonella. По сравнению с дезоксихолатным агаром среда обладает умеренно более высокой селективностью в отношении кишечных патогенов благодаря повышенной концентрации цитратных и дезоксихолатных солей.

Дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии. Цитратные соли в концентрации, предусмотренной рецептурой, ингибируют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры.

Дезоксихолат-цитратный агар HiVeg отличается от стандартного дезоксихолат-цитратного агара полной заменой пептонов животного происхождения на пептоны растительного происхождения, что исключает риски, связанные с пептонами животного происхождения и BSE/TSE — губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Настой HiVeg® является источником углерода и азота; его применяют потому, что он обеспечивает более сильное ингибирование колиформных бактерий по сравнению с экстрактом или простым пептоном. Пептон HiVeg® № 3 обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами.

Колиформные и грамположительные бактерии ингибируются или значительно подавляются синтетическим моющим веществом № III, цитратом натрия и цитратом аммония железа.

Лактоза используется для дифференциации кишечных бацилл:

• лактозосбраживающие бактерии образуют красные колонии;
• нелактозосбраживающие бактерии образуют бесцветные колонии;
• присутствующие колиформные бактерии образуют на среде розовые колонии.

Расщепление лактозы вызывает подкисление среды вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный. Такие колонии обычно также окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, образующейся в результате подкисления среды.

Синтетическое моющее вещество № III связывается с нейтральным красным в кислой среде, вызывая выход красителя из раствора. Восстановление цитрата аммония железа до сульфида железа проявляется образованием чёрного сульфида железа.

Виды Salmonella и Shigella не сбраживают лактозу, однако Salmonella может образовывать H₂S. В этом случае формируются бесцветные колонии с чёрными центрами или без них.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, в результате чего образуется мягкий и неэластичный агар. После автоклавирования агар становится мягким и практически непригодным для штрихового посева.

Salmonella Gallinarum ингибируется, если концентрация синтетического моющего вещества № III увеличена до 0,1 % или более.

Поверхностные колонии нелактозосбраживающих бактерий часто поглощают небольшое количество окраски из среды и приобретают розоватый оттенок, из-за чего такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформные бактерии.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Тип образца

Пищевые образцы.

Сбор и обработка образцов

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы сбора и обработки проб в соответствии с установленными методическими рекомендациями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно сыпучий порошок от светло-жёлтого до розовато-бежевого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель красновато-оранжевого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 7,05 % при 25 °C:

• pH: 7,5 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.