HiMedia MV065-100G Дезоксихолат-цитратный агар, HiVeg

Селективная питательная среда HiMedia MV065-100G Дезоксихолат-цитратный агар, HiVeg, предназначенная для выделения кишечных патогенов, поставляется в виде порошка массой 100 г. Агар применяют преимущественно для исследования пищевых образцов и выделения бактерий родов Salmonella и Shigella; приготовленную среду нельзя стерилизовать в автоклаве.

Назначение и область применения

Дезоксихолат-цитратный агар HiVeg используют как селективную среду для выделения кишечных патогенов, прежде всего видов Salmonella и Shigella, из различных образцов.

Тип образца: пищевые продукты.

Среду применяют для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых образцов. При выделении Shigella рекомендуется использовать менее ингибирующую среду. Селективность агара позволяет вносить достаточно большие посевные дозы без риска перерастания Shigella и Salmonella другой микрофлорой.

Для планового исследования образцов кала и мочи рекомендуется использовать эту среду совместно с другими средами, например агаром МакКонки HiVeg (MV082) и висмут-сульфитным агаром HiVeg (MV027).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Дезоксихолат-цитратный агар приготовлен по модифицированной формуле Лейфсона.

Дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии. Цитратные соли в концентрации, предусмотренной рецептурой, ингибируют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры.

Настой HiVeg® служит источником углерода и азота. Этот компонент используют потому, что вызываемое им подавление колиформ выражено сильнее, чем при применении экстракта или простого пептона. Пептон HiVeg® № 3 обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами.

Колиформные и грамположительные бактерии ингибируются или значительно подавляются благодаря совместному действию синтетического моющего средства № III, цитрата натрия и цитрата аммонийного железа.

Лактоза используется для дифференциации кишечных бацилл:

• бактерии, ферментирующие лактозу, образуют красные колонии;
• бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии;
• при наличии колиформные бактерии образуют на среде розовые колонии.

Расщепление лактозы вызывает подкисление среды вокруг соответствующих колоний, а индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный. Такие колонии обычно также окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, образующейся вследствие подкисления среды.

Синтетическое моющее средство № III в кислой среде связывается с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора.

Восстановление цитрата аммонийного железа до сульфида железа проявляется образованием чёрного сульфида железа. Виды Salmonella и Shigella не ферментируют лактозу, однако Salmonella может образовывать H₂S, формируя бесцветные колонии с чёрными центрами или без них.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, в результате чего формируется мягкий и неэластичный гель. После автоклавирования агар становится мягким и практически непригодным для выполнения посева штрихом.

Salmonella Gallinarum ингибируется при увеличении концентрации синтетического моющего средства № III до 0,1 % и выше.

Поверхностные колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, часто поглощают небольшое количество красителя из среды и могут приобретать розоватый оттенок, из-за чего такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформные бактерии.

Дезоксихолат-цитратный агар HiVeg® отличается от стандартного дезоксихолат-цитратного агара полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны для исключения рисков, связанных с BSE/TSE — губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Методика приготовления среды

1. Приостановите 70,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте среду в автоклаве.
4. Не допускайте чрезмерного нагревания, поскольку он отрицательно влияет на среду.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Требования к образцам и обращение

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

• Для подтверждения видовой принадлежности требуется дальнейшая биохимическая идентификация.
• Из-за различий в пищевых потребностях некоторые микроорганизмы могут демонстрировать слабый рост.
• При выделении Shigella рекомендуется применять менее ингибирующую среду.
• Поверхностные колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, могут приобретать розоватый оттенок и быть ошибочно приняты за колонии колиформных бактерий.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок от светло-жёлтого до розовато-бежевого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель красновато-оранжевого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 7,05 % при 25 °C; pH 7,5 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,30–7,70.

Ожидаемые эксплуатационные характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

Температура хранения сухого препарата: 10–30 °C.

Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.

Храните порошок в плотно закрытом контейнере и используйте до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить препарат в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Храните препарат в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Эксплуатационные характеристики препарата сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Меры безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.

При работе с образцами и культурами используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами. При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам. Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или