HiMedia MV024-500G Основа HiVeg агара с цетримидом

Питательная среда HiMedia MV024-500G Основа HiVeg агара с цетримидом — сухая селективная среда с содержанием цетримида 0,300 г/л для выделения Pseudomonas aeruginosa. Среда предназначена для микробиологического анализа проб воды и других образцов; цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, но может ингибировать некоторые штаммы и вызывать слабый рост.

Назначение

Основа HiVeg агара с цетримидом рекомендована как селективная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из различных образцов, включая пробы воды. Среда также применяется при исследовании косметической продукции и клинических образцов, а также для оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении Pseudomonas aeruginosa.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Технические характеристики

Принцип действия и интерпретация результатов

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных средах, однако для селективного выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также из образцов человеческого, животного или растительного происхождения используют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигмента.

Большинство селективных сред основано на естественной устойчивости определённых видов к различным антибактериальным агентам. Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, одновременно позволяя Pseudomonas aeruginosa формировать типичные колонии.

Цетримид представляет собой четвертичную аммониевую соль и действует как катионное поверхностно-активное вещество. В месте контакта цетримид снижает поверхностное натяжение и оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее воздействие на белки бактериальной мембраны. Цетримид ингибирует широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

Среда A, разработанная King и соавторами, предназначалась для усиления образования пиоцианина бактериями рода Pseudomonas. Агар с цетримидом, разработанный Lowbury, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетримидина для селективного выделения P. aeruginosa. После получения высокоочищенного цетримидина его концентрацию в среде уменьшили.

Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч. Основа HiVeg агара с цетримидом аналогична основе агара с цетримидом, за исключением полной замены пептонов животного происхождения на растительные пептоны для исключения рисков губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивной губчатой энцефалопатии (BSE/TSE), связанных с пептонами животного происхождения.

P. aeruginosa может быть идентифицирована по характерному образованию пиоцианина — растворимого в воде нефлуоресцирующего феназинового пигмента синего цвета, а также по морфологии колоний и характерному виноградоподобному запаху аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas или грамотрицательным стержневидным микроорганизмом, выделяющим пиоцианин. Поэтому среды с цетримидом имеют значение для идентификации P. aeruginosa.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте в 1000 мл среды восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки NA (FD130).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и выделение микроорганизмов

Для выделения P. aeruginosa чашки с агаром с цетримидом следует инокулировать материалом из неселективной среды, например мозгово-сердечного бульона (BHI), среды HiVeg (MV210) или соевой среды HiVeg (MV011).

При высокой концентрации микроорганизмов исследуемую пробу можно непосредственно инокулировать на агар с цетримидом.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — синими или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, демонстрирующие флуоресценцию при 250 нм и сине-зелёную пигментацию, считают предположительно положительными.

При кратковременном хранении культур при комнатной температуре P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию под ультрафиолетовым излучением.

Ограничения и мешающие факторы

• Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не образовывать пиоцианин.
• Другие виды Pseudomonas не образуют пиоцианин, но флуоресцируют под ультрафиолетовым излучением.
• Большинство видов, не относящихся к Pseudomonas, подавляются на агаре с цетримидом; отдельные виды Pseudomonas также могут ингибироваться.
• Некоторые неферментирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую пигментацию от жёлто-коричневой до коричневой.
• Бактерии рода Serratia могут образовывать розовую пигментацию.
• Для подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические и