HiMedia MV024-100G Основа HiVeg агара с цетримидом

Питательная среда HiMedia MV024-100G Основа HiVeg агара с цетримидом производства HiMedia представляет собой сухую селективную основу с содержанием цетримиды 0,300 г/л. Среда предназначена для выделения Pseudomonas aeruginosa из образцов воды и других исследуемых материалов, при этом высокая токсичность цетримиды может подавлять рост отдельных штаммов.

Назначение

Среда рекомендована как селективная питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из различных образцов, включая:

• образцы воды;
• косметическую продукцию;
• клинические образцы;
• образцы для оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении Pseudomonas aeruginosa;
• материалы экологического, человеческого, животного и растительного происхождения.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Основа HiVeg® агара с цетримидом не содержит компонентов животного происхождения: пептоны животного происхождения полностью заменены растительными пептонами для исключения рисков, связанных с BSE/TSE.

Принцип действия и интерпретация результатов

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных питательных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, материалов человеческого, животного или растительного происхождения используют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигмента.

Большинство селективных сред основано на природной устойчивости определённых видов к различным антибактериальным агентам. Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, одновременно позволяя Pseudomonas aeruginosa формировать типичные колонии.

Цетримид является четвертичной аммониевой солью и действует как катионное поверхностно-активное вещество. В области контакта цетримид снижает поверхностное натяжение и оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее воздействие на белки бактериальной мембраны. Цетримид подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

King и соавторы разработали среду A для усиления образования пиоцианина бактериями рода Pseudomonas. Агар с цетримидом, разработанный Lowburry, представляет собой модификацию технического агара, или среды A, с добавлением 0,1 % цетримиды для селективного выделения P. aeruginosa. Позднее, после появления высокоочищенной цетримиды, её концентрация в среде была снижена.

Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч. P. aeruginosa идентифицируют по характерному образованию пиоцианина — синего, растворимого в воде, нефлуоресцирующего феназинового пигмента, — в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградоподобным запахом аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas или грамотрицательным杆овидным микроорганизмом, выделяющим пиоцианин. Поэтому среды с цетримидом применяют для идентификации P. aeruginosa.

Для выделения P. aeruginosa чашки с агаром с цетримидом следует инокулировать материалом с неселективной среды, например:

• бульона BHI;
• среды HiVeg® MV210;
• соевой HiVeg® среды MV011.

При высокой концентрации микроорганизма исследуемый образец можно непосредственно инокулировать на агар с цетримидом.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными синими или сине-зелёными либо непигментированными. Колонии с флуоресценцией при 250 нм и сине-зелёной пигментацией считают предположительно положительными. P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию в ультрафиолетовом свете, если культуры некоторое время остаются при комнатной температуре.

Ограничения и мешающие реакции

1. Среда является селективной; отдельные штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за высокой токсичности цетримиды.
2. Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не образовывать пиоцианин.
3. Другие виды рода Pseudomonas не образуют пиоцианин, но могут флуоресцировать под ультрафиолетовым светом.
4. Большинство видов, не относящихся к роду Pseudomonas, подавляются на агаре с цетримидом; отдельные виды Pseudomonas также могут подавляться.
5. Некоторые нефементирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую окраску от светло-коричневой до коричневой.
6. Бактерии рода Serratia могут образовывать розовую пигментацию.
7. Для подтверждения результатов необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,7 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте к 1000 мл среды восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки NA Selective Supplement FD130.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Образцы воды

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с действующими руководствами и местными стандартами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды при контроле качества:

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: опалесцирующий гель светло-янтарного цвета с небольшим осадком, образующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с массовой концентрацией 4,67 % и содержанием 1 % глицерина при 25 °C.
• pH: 7,00–7,40.
• pH по составу: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч. Степень восстановления принимают за 100 % относительно роста бактерий на агаре с переваром соево-казеинового бульона.