HiMedia MV022-500G EMB HiVeg агар, Левин

Питательная агаровая среда HiMedia MV022-500G EMB HiVeg агар, Левин — сухой порошок массой 500 г для приготовления культуральной среды. Среда предназначена для выделения, количественного учёта и дифференциации представителей Enterobacteriaceae в пищевых продуктах и пробах воды; для идентификации изолированных колоний необходимы подтверждающие тесты.

Назначение и область применения

Среда EMB HiVeg, Левин рекомендуется для выделения, количественного учёта и дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae из различных образцов.

Типы исследуемых образцов

• Пищевые продукты.
• Пробы воды.
• Пищевые и молочные образцы.
• Клинические образцы — для быстрой идентификации Candida albicans при использовании среды EMB, Левин, с добавлением гидрохлорида хлортетрациклина.

Среда применяется для дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes, а также для быстрой идентификации Candida albicans. Положительная идентификация Candida albicans возможна через 24–48 ч инкубации при 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 10 % из таких образцов, как фекалии, ротовые и вагинальные выделения, соскобы с ногтей или кожи. Типичный внешний вид колоний может быть вариабельным.

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих характеристик среды.

Принцип измерения и интерпретация

EMB-агар, Левин, разработан Левиным и используется для дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes, а также для быстрой идентификации Candida albicans. Среда предназначена для обнаружения, количественного учёта и дифференциации представителей колиформной группы.

EMB HiVeg®, Левин, соответствует EMB-агару, Левин, за исключением того, что пептоны животного происхождения полностью заменены растительными пептонами. Это исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE), характерные для пептонов животного происхождения.

Эозин Y и метиленовый синий обеспечивают слабую селективность среды и подавляют рост некоторых грамположительных бактерий. Эти красители служат дифференцирующими индикаторами реакции на ферментацию углеводов и позволяют разделять лактозоферментирующие и нелактозоферментирующие микроорганизмы. Соотношение эозина и метиленового синего установлено приблизительно на уровне 6:1.

Колиформные бактерии при снижении pH поглощают комплекс метиленового синего с эозином, вследствие чего формируют пурпурно-чёрные колонии. Комплекс красителей абсорбируется колонией. Неферментирующие микроорганизмы, вероятно, повышают pH окружающей среды за счёт окислительного дезаминирования белков; это приводит к растворению комплекса метиленового синего с эозином и образованию бесцветных колоний.

Функции компонентов среды:

• Пептон HiVeg®: источник углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых питательных веществ.
• Лактоза: источник энергии и ферментируемый углевод.
• Эозин Y и метиленовый синий: дифференцирующие индикаторы.
• Фосфат: буферный компонент среды.

Техническое отличие среды EMB HiVeg® от стандартного EMB-агара, Левин, заключается в полной замене пептонов животного происхождения пептонами растительного происхождения.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 37,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi, что соответствует ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин. Не допускайте перегрева.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Встряхните среду для окисления метиленового синего, то есть восстановления его синего цвета, и суспендирования осадка. Наличие осадка является обязательной частью среды.
6. Тщательно перемешайте среду.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Исследуемый образец можно непосредственно высевать штриховым методом на чашки с приготовленной средой. Для получения изолированных колоний следует соблюдать стандартные процедуры посева. Одновременно со средой EMB HiVeg® необходимо инокулировать неселективную среду. Для идентификации выделенных колоний следует дополнительно провести подтверждающие тесты.

Инокулированные чашки необходимо инкубировать в защищённом от света месте.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб с учётом действующих локальных нормативов и процедур лаборатории.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Одновременно с EMB-агаром необходимо инокулировать неселективную среду.
2. Для идентификации изолированных колоний необходимо дополнительно проводить подтверждающие тесты.
3. Некоторые штаммы видов Salmonella и Shigella не растут в присутствии эозина и метиленового синего.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды выполняются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

• Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от светло-розового до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: гель красновато-пурпурного цвета с опалесценцией, зеленоватым оттенком и мелкодисперсным осадком в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,75 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 6,90–7,30.
• Расчётный конечный pH: 7,1 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.