HiMedia MV022-100G EMB HiVeg агар, Левин

Питательная микробиологическая среда HiMedia MV022-100G EMB HiVeg агар, Левин — сухой порошкообразный агаровый продукт массой 100 г для приготовления селективно-дифференциальной среды. HiMedia MV022-100G применяют для выделения, количественного определения и дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae в пищевых продуктах и пробах воды; хранение среды предусматривает температуру 10–30 °C в плотно закрытой таре.

Назначение и область применения

EMB HiVeg агар, Левин предназначен для выделения, количественного определения и дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae из различных образцов.

Среду применяют для:

• дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes;
• быстрого выявления Candida albicans;
• обнаружения, количественного определения и дифференциации представителей группы колиформных бактерий;
• анализа пищевых продуктов и молочных образцов;
• анализа проб воды.

Тип образца:

• пищевые продукты;
• пробы воды.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров. Животные пептоны полностью заменены растительными пептонами HiVeg® для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Технические характеристики

Принцип действия и интерпретация результатов

EMB агар, Левин разработан Levine и используется для дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes, а также для быстрого выявления Candida albicans.

Эозин Y и метиленовый синий придают среде умеренную селективность и подавляют рост некоторых грамположительных бактерий. Эти красители служат дифференцирующими индикаторами реакции ферментации углеводов и позволяют различать ферментирующие и неферментирующие лактозу микроорганизмы.

Соотношение эозина и метиленового синего скорректировано приблизительно до 6:1. При снижении pH колиформные бактерии поглощают комплекс метиленового синего с эозином, вследствие чего формируют пурпурно-чёрные колонии. Комплекс красителей абсорбируется колонией.

Неферментирующие микроорганизмы, вероятно, повышают pH окружающей среды за счёт окислительного дезаминирования белка. Это приводит к растворению комплекса метиленового синего с эозином и образованию бесцветных колоний.

Функции компонентов:

• пептон HiVeg® — источник углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых питательных веществ;
• лактоза — источник энергии и ферментируемый углевод;
• эозин Y и метиленовый синий — дифференцирующие индикаторы;
• фосфат — буферный компонент среды.

Для быстрого выявления Candida albicans в клинических образцах Weld предложил использовать EMB агар, Левин с добавлением гидрохлорида хлортетрациклина. Положительная идентификация Candida albicans может быть выполнена после инкубации в течение 24–48 ч при 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 10 %. Исследованию могут подвергаться фекалии, ротовой и влагалищный секрет, соскобы с ногтей или кожи и другие образцы. Типичный внешний вид колоний может варьироваться.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин. Давление при стерилизации — 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа или 1,03 бар.
4. Не допускайте перегрева среды.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Встряхните среду для окисления метиленового синего, то есть восстановления его синего цвета, и суспендирования осадка. Наличие осадка является необходимой частью среды.
7. Тщательно перемешайте среду.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Храните приготовленную среду защищённой от света.

Методика посева и инкубации

1. Исследуемую пробу можно непосредственно штриховым методом нанести на чашки с приготовленной средой.
2. Инокулированные чашки инкубируйте в защищённом от света месте.
3. Для получения изолированных колоний соблюдайте стандартные процедуры посева и инкубации.
4. Одновременно с EMB HiVeg агаром инокулируйте неселективную питательную среду.
5. Для идентификации выделенных колоний дополнительно проведите подтверждающие тесты.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно применимым руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб с учётом руководств и местных нормативных требований.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.

При работе с образцами и культурами:

• используйте защитные перчатки;
• надевайте защитную одежду;
• используйте средства защиты глаз;
• используйте средства защиты лица;
• соблюдайте правила работы микробиологической лаборатории;
• применяйте стандартные меры предосторожности, установленные для обращения с образцами;
• при необходимости обращайтесь к индивидуальным паспортам безопасности.

Ограничения применения

1. EMB агар необходимо использовать совместно с неселективной питательной средой.
2. Для идентификации выделенных колоний необходимо дополнительно проводить подтверждающие тесты.
3. Некоторые штаммы видов Salmonella и Shigella не растут в присутствии эозина и метиленового синего.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-розовый или пурпурный однородный свободно сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель красновато-пурпурного цвета, опалесцирующий, с зеленоватым оттенком и мелкодисперсным осадком.

Реакция и pH

Реакцию определяют для водного раствора с концентрацией 3,75 % м/об при 25 °C.

• Реакция: pH 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.