HiMedia MV021-500G Трехсахарный железный HiVeg агар

Питательная микробиологическая агаризованная среда HiMedia MV021-500G Трехсахарный железный HiVeg агар предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образованию сероводорода; масса упаковки — 500 г. Среда применяется для анализа чистых бактериальных изолятов из воды и пищевых продуктов, содержит ферментируемые углеводы и имеет конечный pH 7,4 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Среда HiMedia MV021-500G Трехсахарный железный HiVeg агар рекомендована для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по следующим признакам:

• ферментация декстрозы;
• ферментация лактозы;
• ферментация сахарозы;
• образование сероводорода (H₂S);
• образование газа.

Тип образца: чистый бактериальный изолят из воды или пищевой пробы.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам. Экстракт HiVeg® эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендируйте 64,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Дайте среде застыть в пробирках в виде скошенного агара с вертикальным столбиком длиной около 1″ (25,4 мм).

Для получения лучших результатов среду можно стерилизовать автоклавированием при давлении 10 фунтов (≈0,069 МПа), температуре 115 °C в течение 15 мин.

Принцип измерения и интерпретация

Трехсахарный железный HiVeg агар приготовлен с полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны, поэтому среда не содержит связанных с животными компонентами рисков BSE/TSE. Среда представляет собой модификацию трехсахарного железного агара, первоначально предложенного Sulkin и Willett и модифицированного Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae.

Гидролизат HiVeg®, пептон HiVeg®, дрожжевой экстракт и экстракт HiVeg® обеспечивают среду азотистыми и углеродсодержащими соединениями, длинноцепочечными аминокислотами, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Лактоза, сахароза и декстроза являются ферментируемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для определения H₂S. Феноловый красный используется как индикатор pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, изменяя цвет среды с красного на жёлтый. В столбике выделяется больше кислот в результате ферментации, чем на скошенной части в результате дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты при окислительном декарбоксилировании пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике.

Щелочная красная скошенная часть и кисло-жёлтый столбик после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Для усиления щелочной реакции на скошенной части необходимо обеспечить свободный воздухообмен, закрывая крышку пробирки неплотно. При плотном закрывании пробирки кислотная реакция, вызванная только ферментацией декстрозы, распространится также на скошенную часть.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно с глюкозой, образуют большое количество кислоты. В этой области не происходит восстановления pH, поэтому на скошенной части и в столбике наблюдается кислотная реакция.

Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. H₂S соединяется с ионами железа в железных солях с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Образование газа CO₂ определяется по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Для инокуляции пробирки с TSI-агаром не следует использовать инокуляционную петлю при проколе столбика: механическое расщепление среды может привести к ложноположительному результату по газообразованию.

Трехсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном — [MV112/MV111] — для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментирована только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментированы глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Пузырьки или трещины в среде: образование газа.
• Чёрный осадок: образование газа H₂S.

Ограничения метода

1. Некоторые представители семейства Enterobacteriaceae и образующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S на TSI HiVeg® агаре.
2. Некоторые бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера HiVeg®, но не на TSI HiVeg® агаре. Это может быть связано с тем, что утилизация сахарозы в TSI HiVeg® агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.
3. Некоторые представители Enterobacteriaceae и образующие H₂S штаммы Salmonella могут не быть положительными по H₂S на TSI-агаре.
4. Некоторые бактерии могут показывать образование H₂S на железном агаре Клиглера, но не на TSI-агаре, поскольку использование сахарозы в TSI-агаре подавляет ферментативный путь образования H₂S.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для водных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Прочный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция

Реакция водного