HiMedia MV021-100G Трехсахарный железный HiVeg агар

Питательная агаризованная среда HiMedia MV021-100G Трехсахарный железный HiVeg агар предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образованию сероводорода. Среда применяется для исследования чистых бактериальных изолятов из воды и пищевых продуктов, при этом результаты по H₂S могут быть ложноотрицательными для отдельных представителей Enterobacteriaceae и Salmonella.

Назначение

Среда рекомендована для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по следующим признакам:

• ферментация декстрозы;
• ферментация лактозы;
• ферментация сахарозы;
• образование сероводорода (H₂S).

Тип образца: чистый бактериальный изолят из воды или пищевой пробы.

Состав

Концентрация компонентов указана в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Экстракт HiVeg® эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Трехсахарный железный HiVeg® агар получают полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны; среда не содержит компонентов, связанных с рисками BSE/TSE.

Среда является модификацией трехсахарного железного агара, первоначально предложенного Sulkin и Willett и модифицированного Hajna для идентификации Enterobacteriaceae. По рабочим характеристикам среда эквивалентна среде животного происхождения, рекомендованной APHA для исследования мясных и пищевых продуктов, а также молока и молочных продуктов. Среда также используется при микробиологических предельных испытаниях для подтверждения присутствия Salmonella и при идентификации грамотрицательных палочек.

Функции компонентов:

• гидролизат HiVeg®, пептон HiVeg®, дрожжевой экстракт и экстракт HiVeg® обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, длинноцепочечные аминокислоты, микроэлементы и витамины группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстроза являются сбраживаемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для выявления H₂S;
• феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, из-за чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике среды выделяется больше кислот при ферментации, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике.

Щелочная красная скошенная часть и кислая жёлтая нижняя часть после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Для усиления щелочной реакции в скошенной части необходимо обеспечить свободный воздухообмен, закрывая пробирку неплотно. При плотном закрытии пробирки кислотная реакция, вызванная только ферментацией декстрозы, будет распространяться также на скошенную часть.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно в дополнение к глюкозе, образуют большое количество кислоты. В этой зоне pH не возвращается к исходному значению, поэтому наблюдается кислая реакция как в скошенной части, так и в столбике.

Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. H₂S соединяется с ионами железа из солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Кислая реакция и почернение обычно возникают в столбике пробирки. Образование газа CO₂ выявляют по трещинам или пузырькам в среде, возникающим при выходе накопившегося газа. Для посева пробирки с TSI не следует использовать инокуляционную петлю при проколе столбика: механическое расщепление среды может привести к ложноположительному результату по газообразованию.

Трехсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром/бульоном MV112/MV111 для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций

• щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза;
• кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза;
• наличие пузырьков или трещин: образование газа;
• наличие чёрного осадка: образование H₂S.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 64,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав скошенную часть и столбик длиной около 1 дюйма (25,4 мм).

Для получения лучших результатов допускается стерилизация автоклавированием при давлении 10 фунтов на квадратный дюйм (≈0,069 МПа), температуре 115 °C и времени выдержки 15 мин.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

1. Отдельные представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S на трехсахарном железном HiVeg® агаре.
2. Некоторые бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера HiVeg®, но не на трехсахарном железном HiVeg® агаре. Это может происходить из-за того, что утилизация сахарозы в трехсахарном железном HiVeg® агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 6,45 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Скошенная часть | Стол