HiMedia MU021-500G Трехсахарный железный агар

Микробиологическая питательная среда HiMedia MU021-500G Трехсахарный железный агар предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образованию сероводорода. Среда применяется для исследования чистых бактериальных изолятов и фармацевтического контроля, при этом результаты по H₂S требуют учета ограничений метода TSI-агара.

Назначение

Трехсахарный железный агар рекомендуется для идентификации грамотрицательных кишечных палочек на основании ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы и образования сероводорода в соответствии с требованиями Фармакопеи США (USP).

Среда предназначена для работы с чистым бактериальным изолятом. В фармацевтических испытаниях среда применяется для идентификации грамотрицательных бацилл.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация результатов

Трехсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Состав среды соответствует Фармакопее США (USP).

• Триптон и пептон обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.
• Лактоза, сахароза и декстроза являются сбраживаемыми углеводами.
• Тиосульфат натрия способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении.
• Тиосульфат натрия служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, который расщепляет его с образованием H₂S.
• Тиосульфат натрия и ионы железа(III) или железа(II) формируют индикаторную систему для выявления H₂S.
• Тиосульфат натрия также инактивирует галогены и может снижать их токсичность в исследуемой пробе, если они присутствуют при проведении микробиологических испытаний.
• Феноловый красный используется как индикатор pH.

Микроорганизмы, сбраживающие декстрозу, образуют различные кислоты, изменяющие цвет среды с красного на желтый. В столбике среды выделяется больше кислот в результате ферментации, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике.

Щелочная, красная скошенная часть и кислая, желтая пробка после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует декстрозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно в дополнение к декстрозе, образуют большое количество кислоты. В этой области pH не возвращается к исходному значению, поэтому микроорганизм дает кислую реакцию как в скошенной части, так и в столбике.

Образование газа выявляют по трещинам или пузырькам в среде, возникающим при выходе накопившегося газа. Тиосульфат восстанавливается несколькими видами бактерий до сероводорода. H₂S взаимодействует с ионами железа(III) солей железа с образованием нерастворимого черного осадка сульфида железа(II). Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Трехсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром или мочевинным бульоном для различения видов Salmonella и Proteus:

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только декстроза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются декстроза и сахароза, либо декстроза и лактоза, либо все три сахара — декстроза, лактоза и сахароза.
• Наличие пузырьков или трещин: образование газа.
• Наличие черного осадка: образование H₂S.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 59,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Дайте среде застыть в виде скошенной поверхности со столбиком длиной около 1 дюйма (25,4 мм).

Пробоподготовка и обращение с образцами

Тип образца: чистый бактериальный изолят.

При исследовании фармацевтических продуктов соблюдайте соответствующие методики обработки образцов, включая обработку вязких материалов, как предусмотрено процедурами контроля стерильности.

После использования загрязненные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Правила безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Некоторые представители семейства Enterobacteriaceae и образующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S на трехсахарном железном агаре. Некоторые бактерии способны образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на трехсахарном железном агаре.

Это может происходить потому, что утилизация сахарозы в трехсахарном железном агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-желтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

pH

pH: 7,10–7,50.

Испытание на ростовые свойства

Испытание на ростовые свойства проводят в соответствии с требованиями Фармакопеи США (USP).

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч.