HiMedia MU021-100G Трехсахарный железный агар

Агаризованная питательная среда HiMedia MU021-100G Трехсахарный железный агар, производитель HiMedia, предназначена для идентификации грамотрицательных энтеробактерий по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы и образованию сероводорода. Среда применяется для анализа чистых бактериальных изолятов; масса упаковки составляет 100 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Трёхсахарный железный агар рекомендуется для идентификации грамотрицательных кишечных палочек по следующим признакам:

• ферментация декстрозы;
• ферментация лактозы;
• ферментация сахарозы;
• образование сероводорода (H₂S).

Методика предназначена для работы с чистым бактериальным изолятом. Применение среды для фармацевтических испытаний выполняют в соответствии с требованиями Фармакопеи США (USP).

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 59,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Дайте среде застыть в виде скошенной поверхности со столбиком длиной около 25,4 мм (1″).

Принцип действия и интерпретация

Трёхсахарный железный агар первоначально предложили Sulkin и Willett, позднее среда была модифицирована Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда соответствует требованиям Фармакопеи США (USP) и рекомендуется для идентификации грамотрицательных бацилл при фармацевтических испытаниях.

Функции компонентов среды:

• триптон и пептон обеспечивают поступление азотистых соединений, серы, микроэлементов и витаминов группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстроза являются ферментируемыми углеводами;
• тиосульфат натрия участвует в реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении;
• тиосульфат натрия служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей его с образованием H₂S;
• тиосульфат натрия совместно с ионами железа образует индикаторную систему для определения H₂S;
• тиосульфаты инактивируют галогены и могут снижать их токсичность в исследуемой пробе, в том числе при испытаниях на микробиологические пределы;
• феноловый красный является индикатором pH.

Бактерии, ферментирующие декстрозу, образуют различные кислоты, изменяющие цвет среды с красного на жёлтый. В столбике среды при ферментации выделяется больше кислот, чем в скошенной части, где преобладает дыхание. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют значительное количество кислоты в столбике.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислый жёлтый столбик после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует декстрозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно в дополнение к декстрозе, образуют большое количество кислоты. В этой области не происходит восстановления исходного значения pH, поэтому скошенная часть и столбик имеют кислую реакцию и жёлтую окраску.

Газообразование CO₂ выявляют по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. H₂S соединяется с ионами железа в железосодержащих солях с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Трёхсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром или мочевинным бульоном для дифференциации видов Salmonella и Proteus: |M112/M111|

Интерпретация реакций:

• щелочная скошенная часть / кислый столбик — ферментируется только декстроза;
• кислая скошенная часть / кислый столбик — ферментируются декстроза и сахароза, декстроза и лактоза либо все три сахара: декстроза, лактоза и сахароза;
• наличие пузырьков или трещин — образование газа;
• наличие чёрного осадка — образование H₂S.

Тип образца

Тип образца: чистый бактериальный изолят.

Сбор и обращение с образцами

При работе с фармацевтическими продуктами для обработки вязких материалов применяйте соответствующие методики подготовки образцов, предусмотренные для испытаний на стерильность.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно действующим установленным руководствам.
• Требования безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Некоторые представители семейства Enterobacteriaceae, включая продуцирующие H₂S штаммы Salmonella, могут не давать положительной реакции на H₂S на трёхсахарном железном агаре. Некоторые бактерии способны образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на трёхсахарном железном агаре. Это может быть связано с тем, что утилизация сахарозы в трёхсахарном железном агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, легко пересыпающийся порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Водородный показатель

pH: 7,10–7,50.

Испытание на стимуляцию роста

Испытание на стимуляцию роста проводят в соответствии с требованиями Фармакопеи США (USP).

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч.