Агар Xylose Lysine Deoxycholate в чашке HiMedia MPH031-20PT (20 чашек)

Готовая селективная и дифференциальная агаровая среда Агар Xylose Lysine Deoxycholate в чашке HiMedia MPH031-20PT (20 чашек) предназначена для посева на готовые чашки диаметром 90 мм. Среду применяют для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella из фармацевтических образцов; рекомендуемая посевная доза составляет 50–100 КОЕ.

Назначение и область применения

Среда предназначена для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella из фармацевтических образцов при микробиологическом контроле по гармонизированным методикам USP/EP/BP/JP/IP. Также применяется для фармацевтических испытаний и контроля нестерильной продукции на наличие или отсутствие Salmonella после обогащения в бульоне для обогащения Salmonella по методу Раппапорта—Вассилиадиса (MH1491).

Среда изначально разработана как селективная и дифференциальная для выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала. Рекомендуемый тип образца для данного продукта — фармацевтические образцы.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик среды.

Принцип действия

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих палочек, включающее более 100 видов бактерий, обычно обитающих в кишечнике человека и животных. Представители нормальной кишечной микрофлоры называются колиформными бактериями. К клинически значимым родам семейства Enterobacteriaceae относятся Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.

Бактерии рода Salmonella отличаются высокой сложностью среди представителей Enterobacteriaceae. Инфекции человека, вызываемые Salmonella, чаще всего возникают при употреблении пищи, воды или молока, загрязнённых испражнениями человека или животных. Для селективного выделения и идентификации кишечных палочек, включая Salmonella, разработано множество питательных сред.

Дезоксихолат, железо-аммонийный цитрат и натрия тиосульфат действуют как селективные компоненты, подавляющие рост грамположительных микроорганизмов. Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами и факторами роста.

Ксилоза, сахароза и лактоза являются ферментируемыми сахарами среды. Большинство кишечных бактерий ферментируют ксилозу, тогда как Shigella — нет; это позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella. Salmonella метаболизирует ксилозу и декарбоксилирует лизин, в результате чего pH смещается в щелочную сторону и реакция становится похожей на реакцию Shigella. Чтобы предотвратить такую реакцию у лизин-положительных колиформных бактерий, в среду добавлены повышенные количества лактозы и сахарозы. Образование кислоты при ферментации этих сахаров препятствует декарбоксилированию лизина непатогенными продуцентами H₂S.

Натрия тиосульфат способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении. Он также служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей тиосульфат с образованием H₂S. Натрия тиосульфат и железо-аммонийный цитрат служат индикаторами образования H₂S. Натрия тиосульфат также инактивирует галогены, соединения ртути и альдегиды, что может уменьшать их токсичность в исследуемом образце при испытаниях на микробные пределы. Натрия хлорид поддерживает осмотическое равновесие среды, а феноловый красный используется как индикатор pH.

Ферментация сахаров сопровождается образованием кислот. Это вызывает изменение оттенка индикатора, окраски колоний и среды с красной на жёлтую при длительной инкубации. При щелочных условиях образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами; подкисление среды в результате ферментации углеводов может подавлять эту реакцию. В щелочной среде окраска среды снова становится красной.

Среда подходит для скрининга образцов со смешанной кишечной микрофлорой: выделение Salmonella и Shigella не маскируется даже обильным ростом других видов.

Методика посева

1. Асептически нанесите на чашку исследуемый инокулят в количестве 50–100 КОЕ одним из способов: штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением по среде.

Сбор и подготовка образцов

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы сбора и обработки согласно установленным руководствам. После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать в автоклаве.

Контроль качества

Внешний вид: стерильный агар Xylose Lysine Deoxycholate в одноразовых чашках диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, пузырьков и трещин.

Цвет среды: красный.

Объём среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.

pH: 7,20–7,60.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральную реакцию оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение установленного времени. Восстановление принимают за 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Испытание на ростовые свойства проводят по гармонизированной методике USP/EP/BP/JP после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч. Восстановление принимают за 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре, а грибов — на агаре Сабуро с декстрозой.

Индикативные свойства: внешний вид колоний и индикаторная реакция сопоставимы с результатами, полученными на ранее испытанной и одобренной серии среды. Испытание проводят при заданной температуре в течение периода времени из установленного диапазона, используя посевную дозу ≤100 КОЕ (30–35 °C, 24–48 ч).

Ингибирующие свойства: рост тест-микроорганизма отсутствует при заданной температуре в течение периода не менее максимального установленного времени; посевная доза — ≤100 КОЕ (30–35 °C, 72 ч).

Культуральную реакцию оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение указанного для микроорганизма времени.