Готовая питательная среда в чашках «Агар Мюллера-Хинтона чашка, с 2 % NaCl HiMedia MP5389-50PT (50 чашек)» — стерильный агар с концентрацией NaCl 2 %. Среда предназначена для определения чувствительности клинических изолятов Staphylococcus spp. к оксациллину и применяется только для чистых культур.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности к оксациллину бактерий рода Staphylococcus, выделенных из клинических образцов. Агар Мюллера—Хинтона с 2 % NaCl предназначен для тестирования чувствительности к оксациллину в соответствии с рекомендациями CLSI.

Состав

Содержание компонентов, г/л:

Эквивалент настоя говядины.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Принцип и метод определения

Формуляция агара Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования этих бактерий были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время его используют как тест-среду для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам.

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для диффузии противомикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков через агаровый гель, как описано в утверждённом стандарте CLSI. Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали среду для тестирования чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности микроорганизмов принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности благодаря воспроизводимости результатов.

Настой HM B и ациказа служат источниками азотистых соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, определяемым по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии противомикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков в агар. Используют диск с одной концентрацией противомикробного препарата; измеренные диаметры зон ингибирования сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК).

Для проведения теста стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски, пропитанные заданным количеством противомикробных препаратов, инкубируют чашку и измеряют зоны ингибирования вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением результатов с критериями CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми организмами бета-лактамазы. Среда не подходит для диско-диффузионного тестирования медленнорастущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и неточности измерений.

Методика применения

1. Асептически нанесите тестируемый инокулят на поверхность чашки штриховым методом, инокуляцией или поверхностным распределением.
2. Используйте посевную дозу 50–100 КОЕ.

Типы образцов и обращение с ними

Типы клинических образцов: микроорганизмы, выделенные из респираторных экссудатов, мочи, кала и других клинических материалов.

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие установленные процедуры обращения с ними (10, 11).

Контроль качества

Внешний вид: стерильный агар Мюллера—Хинтона с 2 % NaCl в одноразовых чашках диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.

Цвет среды: светло-янтарный.

Объём среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.

pH: 7,20–7,40.

Контроль стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч. После инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч вокруг полоски Oxacillin Ezy MIC™ (EM065) наблюдается эллиптическая зона ингибирования.

• В скобках указаны соответствующие номера WDCM.

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
• Плотность инокулята может влиять на размер зоны: слишком плотный инокулят может приводить к уменьшению зон, а слишком малый — к их увеличению.
• Для получения корректных результатов необходимо обеспечить надлежащее хранение дисков с антибиотиками, поскольку условия хранения могут влиять на их активность.
• В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.
• Требования разных микроорганизмов к условиям роста различаются; на среде могут наблюдаться разные варианты роста.
• Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Среду рекомендуется валидировать для конкретных микроорганизмов, не указанных в COA, с учётом требований пользователя.
• Для предотвращения образования конденсата рекомендуется хранить чашки при 24–30 °C.

Условия хранения и срок годности

После получения хранить при 20–30 °C. Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Меры предосторожности и утилизация

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального применения. Перед вскрытием упаковки прочитайте этикетку. При работе используйте защитные перчатки, одежду, очки и средства защиты лица. Соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами, а также стандартные меры предосторожности при работе с клиническими образцами. При необходимости руководствуйтесь паспортами безопасности.

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием. Инфекционные материалы и материалы, контактировавшие с клиническими образцами, обеззараживайте и утилизируйте в соответствии с установленными лабораторными процедурами и актуальными лабораторными методиками (10, 11).