Готовая питательная среда «Агар Мюллера-Хинтона чашка, с 2 % NaCl HiMedia MP5389-10PT (10 чашек)» содержит по 25 мл агара в одноразовых чашках диаметром 90 мм. Среда предназначена для определения чувствительности клинических изолятов Staphylococcus spp. к оксациллину; её применяют для тестирования чистых культур.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности к оксациллину бактерий рода Staphylococcus, выделенных из клинических образцов. Агар Мюллера—Хинтона с 2 % NaCl используется для испытания чувствительности к антимикробным препаратам.

Состав

Состав, г/л:

Эквивалентно настою из говядины.

Эквивалентно кислотному гидролизату казеина.

Формула скорректирована и стандартизована для обеспечения заданных характеристик. Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Принцип действия и интерпретация

Первоначально рецептура Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria (1). Позднее для их культивирования разработали другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности к антимикробным препаратам (2). Среда рекомендована для диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI (3).

Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали эту среду для испытаний чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата (4). Комитет ВОЗ по стандартизации испытаний чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов (5).

Настой HM B и ациказа обеспечивают поступление азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это оценивают по значениям минимальной подавляющей концентрации (МПК) для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии в агар антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски. В методе используют диск с одной концентрацией антимикробного агента; наблюдаемые диаметры зон сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК) (6, 7, 8). Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с заданным количеством антимикробных препаратов, инкубируют чашку и измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI (7).

На результаты испытания чувствительности методом диффузии в дисках влияют глубина агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами бета-лактамазы (7, 8). Среда не подходит для испытаний методом диффузии в дисках с медленно растущими микроорганизмами, анаэробами и капнофилами. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и неточным результатам (9).

Агар Мюллера—Хинтона с 2 % NaCl рекомендован CLSI для испытания чувствительности к оксациллину.

Методика проведения анализа

На поверхность чашки асептически наносят тестовый инокулят — штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением. Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Для метода диффузии в дисках стандартизованную суспензию тестируемого микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. На поверхность помещают диски с определёнными количествами антимикробных препаратов, после инкубации измеряют зоны подавления роста и сопоставляют результат со стандартами CLSI.

Типы образцов и обращение с ними

Типы образцов: клинические образцы; выделенные из них микроорганизмы, в том числе из респираторных выделений, мочи и кала.

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие установленные правила обращения с пробами (10, 11).

Контроль качества

Внешний вид: стерильная чашка с агаром Мюллера—Хинтона и 2 % NaCl, одноразовая, диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.

Цвет среды: светло-янтарный.

Количество среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.

pH: 7,20–7,40.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч. После инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч вокруг полоски Oxacillin Ezy MIC™ (EM065) наблюдается эллиптическая зона подавления роста.