Готовая питательная среда Агар HiCrome® Chromogenic Coliform в чашке (CCA чашка) HiMedia MP1991I-20PT (20 чашек) предназначена для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий и содержит 25 мл агара в чашке диаметром 90 мм. Среду применяют для анализа проб воды методом мембранной фильтрации или прямого посева, а результаты инкубации учитывают через 21 ± 3 ч при 36 ± 2 °C.

Назначение и соответствие

Среда рекомендована для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в пробах воды. Состав и критерии эффективности соответствуют спецификации ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016.

Состав

Состав среды стандартизован для соответствия заданным параметрам эффективности.

Триптон: ферментативный гидролизат казеина.

Принцип дифференциации

Среда содержит три хромогенных субстрата. β-D-галактозидаза, вырабатываемая колиформными бактериями, расщепляет 6-хлор-3-индоксил-1-β-D-галактопиранозид с образованием колоний от розового до красного цвета. β-D-глюкуронидаза, вырабатываемая E. coli, расщепляет 5-бром-4-хлор-3-индоксил-1-β-D-глюкуроновую кислоту. Колонии E. coli приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску при расщеплении обоих хромогенов. Третий хромоген, IPTG, усиливает цветовую реакцию.

Добавление L-триптофана улучшает реакцию образования индола и повышает надёжность выявления. Триптон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают источники азота, ферментируемые углеводы и другие необходимые для роста питательные вещества. Фосфаты выполняют буферную функцию. Состав среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий. Tergitol-7 подавляет рост грамположительных бактерий, а также некоторых грамотрицательных бактерий, не относящихся к колиформам.

Методика проведения анализа

Посев на чашку

Тестовую посевную дозу 50–100 КОЕ асептически наносят на чашку штриховым методом, инокулируют или распределяют по поверхности среды. Допускается посев методом заливки в чашку или распределение пробы по поверхности готовой среды. Также применим метод мембранной фильтрации.

Подготовка пробы методом мембранной фильтрации

1. Отфильтруйте 100 мл пробы через мембранный фильтр.
2. Минимальный объём для фильтрации — 10 мл или соответствующее разведение, чтобы обеспечить равномерное распределение бактерий на мембранном фильтре.

Инкубация и дифференциация

1. После фильтрации поместите мембранный фильтр на поверхность хромогенного колиформного агара, не допуская попадания воздуха под фильтр.
2. Переверните чашку Петри и инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 21 ± 3 ч.
3. Оцените изменение окраски колоний на мембранном фильтре.

Подтверждение результата

Для подтверждения E. coli нанесите каплю реактива Ковача на колонию тёмно-синего или фиолетового цвета. Появление вишнёво-красной окраски указывает на положительную реакцию.