Агар Мюллера-Хинтона чашка, с 2 % глюкозы HiMedia MP1825-50PT (50 чашек)

Готовая питательная среда «Агар Мюллера-Хинтона чашка, с 2 % глюкозы HiMedia MP1825-50PT (50 чашек)» производства HiMedia содержит 2 % глюкозы и метиленовый синий. Среда предназначена для определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам методом дисковой диффузии и применяется только для чистых культур.

Назначение

Среда предназначена для дисково-диффузионного тестирования чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам. Тип образца — выделенные микроорганизмы из клинических образцов.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия эксплуатационным параметрам. # Эквивалент мясного настоя.

Принцип действия и интерпретация

Изначально состав Мюллера—Хинтона разработан как простая прозрачная агаровая среда для выращивания патогенных микроорганизмов. Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий рекомендациям CLSI для противогрибковых исследований, предназначен для диффузии противогрибковых веществ с дисков через агаровый гель. Добавление глюкозы до конечной концентрации 2 % обеспечивает подходящие условия для роста грибов. Метиленовый синий в конечной концентрации 5 мкг/мл улучшает определение границ зон задержки роста.

Кирби, Бауэр и соавторы рекомендовали агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности бактерий к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов. Для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae к антимикробным препаратам рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином. Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий рекомендациям CLSI для противогрибковых исследований, рекомендован для тестирования чувствительности к противогрибковым препаратам с использованием дисков.

Настой HM B и Acicase™ обеспечивают поступление азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид в отношении токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Декстроза (глюкоза) также служит источником энергии для грибковых культур. Метиленовый синий улучшает определение границ зон задержки роста.

Подготовка и проведение анализа

Подготовка посевного материала

1. Подготовьте инокулят из пяти отдельных колоний размером около 1 мм, выросших в течение 24 ч на агаре Сабуро с декстрозой (MP063) при 35 ± 2 °C. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного 0,85 % раствора хлорида натрия.
2. Перемешайте полученную суспензию на вихревом смесителе и скорректируйте мутность до концентрации 1 × 10⁶–5 × 10⁶ клеток/мл, соответствующей стандарту 0,5 МакФарланда.

Посев и дисково-диффузионное исследование

1. Для определения чувствительности к противогрибковым препаратам используйте готовые чашки с агаром Мюллера—Хинтона, содержащим 2 % глюкозы и метиленовый синий.
2. Погрузите стерильный нетоксичный ватный тампон на деревянном аппликаторе в стандартизованный инокулят, мутность которого скорректирована для получения полусливного роста на чашке Петри. Плотно проверните пропитанный тампон о верхнюю внутреннюю стенку пробирки, чтобы удалить избыток жидкости. Проведите тампоном по всей поверхности агара три раза, поворачивая чашку на 60° между проходами. Оставьте инокулят высыхать на 5–15 мин при закрытой крышке.
3. Соблюдая правила асептики, нанесите диски. Расстояние между центрами дисков должно составлять не менее 24 мм.
4. Переверните чашки и поместите их в термостат, установленный на 35 ± 2 °C, не позднее чем через 15 мин после нанесения дисков.
5. Осмотрите каждую чашку после инкубации в течение 20–24 ч. При правильном посеве зоны задержки роста должны быть равномерно круглыми, а рост — полусливным. Оценивайте результат через 48 ч только в том случае, если после 24 ч инкубации рост был недостаточным.

Для нанесения тестового инокулята также допускается штриховой посев, инокуляция или поверхностное распределение по чашке в асептических условиях; рекомендуемая посевная доза — 50–100 КОЕ.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Контроль качества

Характеристики готовой среды

• Внешний вид: стерильный агар Мюллера—Хинтона с 2 % глюкозы и метиленовым синим в одноразовых чашках диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-зелёный.
• Объём среды: 25 мл в чашке диаметром 90 мм.
• pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики

Диски различных препаратов испытывали на стандартных штаммах ATCC; зоны задержки роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч. Испытания проводили согласно действующему протоколу CLSI M6 и стандарту CLSI M100; концентрации антибиотиков указаны в соответствии со стандартами CLSI.