Готовая чашка с агаром Мюллера—Хинтона, с 5 % кровью барана HiMedia MP1806-20PT (20 чашек) — питательная среда в чашке диаметром 90 мм с объёмом 25 мл. Среда предназначена для определения чувствительности видов Streptococcus к противомикробным препаратам; исследуют только чистые культуры.

Область применения

Среду используют для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам методом дисковой диффузии. Рекомендована для исследования видов Streptococcus.

Типы образцов: клинические образцы; выделенные микроорганизмы из мочи, кала, гноя и других материалов. Для тестирования используют чистые культуры. Клинические мазки допускается исследовать непосредственно, но результат следует подтвердить повторным тестом на чистой культуре.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения заданных рабочих характеристик.

Эквивалентно настою из говядины.

Эквивалентно кислотному гидролизату казеина.

Принцип действия и интерпретация

Формула Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для выращивания патогенных видов Neisseria. Позднее для их культивирования появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время его используют для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам.

Среда предназначена для диффузии противомикробных веществ из бумажных дисков через агаровый гель; методика описана в стандартах CLSI и EUCAST. Кирби—Бауэр и соавторы рекомендовали эту среду для тестирования чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Настой HM и ациказа обеспечивают азотсодержащие соединения, углерод, серу и другие необходимые питательные вещества. Крахмал защищает от токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это проверяют по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии противомикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков в агар. Используют диск с одной концентрацией противомикробного препарата; диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации. Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с заданным количеством противомикробных веществ, чашки инкубируют и измеряют диаметры зон подавления роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI и EUCAST.

Методика проведения анализа

1. Аспетически нанесите тестовую суспензию на поверхность чашки штриховым методом, инокуляцией или поверхностным распределением. Рекомендуемая посевная доза — 50–100 КОЕ.
2. Для выполнения диско-диффузионного теста равномерно распределите стандартизованную суспензию микроорганизма тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности бумажные диски, пропитанные заданным количеством противомикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашку, затем измерьте диаметры зон подавления роста вокруг дисков.
5. Определите чувствительность, сопоставив диаметры зон со стандартами CLSI и EUCAST.

На результаты диско-диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность дисков, концентрация посевного материала, pH среды и продукция исследуемыми микроорганизмами β-лактамазы. Плотная посевная суспензия может привести к уменьшению зон, а слишком редкая — к их увеличению. Надлежащие условия хранения дисков необходимы для сохранения их активности.

Технические характеристики и контроль качества

• Форма выпуска: стерильная чашка с агаром Мюллера—Хинтона и 5 % кровью барана
• Диаметр одноразовой чашки: 90 мм
• Объём среды в чашке: 25 мл
• Поверхность среды: выпуклая
• Цвет среды: красный
• pH: 7,10–7,50
• Контроль стерильности: соответствует критериям выпуска
• Внешний вид: отсутствие чёрных частиц, трещин и пузырьков

Каждую серию среды проверяют на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA).

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч с добавлением 5 % стерильной крови барана (масса/объём).

Хранение и срок годности

• Температура хранения после получения: 2–8 °C
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании согласно инструкции на этикетке, соблюдении рекомендованной температуры хранения и использовании в пределах срока годности.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чистых культур.
• Плотность посевной суспензии влияет на размер зон подавления роста: слишком плотный посев может уменьшить зоны, слишком редкий — увеличить.
• Активность дисков с антибиотиками зависит от соблюдения условий их хранения.
• Результаты определения чувствительности в лабораторных условиях не всегда совпадают с результатами применения препарата в организме.

Безопасность и утилизация

Только для диагностики in vitro и профессионального применения. Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте защитные перчатки, одежду, очки и защиту лица. Соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами, а также стандартные меры предосторожности при обращении с клиническими образцами. Дополнительные указания по безопасности приведены в паспортах безопасности.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией стерилизуйте в автоклаве. Использованные или непригодные препараты утилизируйте безопасным способом — автоклавированием и/или сжиганием. Инфекционные материалы и материалы, контактировавшие с клиническими образцами, обеззараживайте и утилизируйте в соответствии с действующими лабораторными процедурами.