Готовая чашка с агаром Мюллера—Хинтона Агар Мюллера-Хинтона чашка (200mm чашка) HiMedia MP173XL-20PT (20 чашек) содержит 110 мл среды в одноразовой чашке диаметром 200 мм. Среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам в чистых культурах, выделенных из клинических образцов.

Назначение

Среду применяют для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам, выделенных из клинических образцов, включая мочу, кал и кровь. Продукт предназначен только для исследования чистых культур.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизована для соответствия параметрам эксплуатационных характеристик.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для их культивирования появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время среду используют для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам.

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для диффузии противомикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель. Среду выбрали для испытаний чувствительности по нескольким причинам:

• обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов при испытаниях чувствительности между сериями;
• содержит мало ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддерживает рост большинства неприхотливых бактериальных патогенов;
• накоплены данные и опыт, позволяющие оценивать её эксплуатационные характеристики.

Кирби—Бауэр и соавторы рекомендовали среду для испытаний чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска, содержащего высокую концентрацию препарата. Комитет Всемирной организации здравоохранения по стандартизации испытаний чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря его воспроизводимости. Для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % овечьей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Настой HM B и ациказа служат источниками азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это контролируют по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии противомикробных веществ из бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией противомикробного препарата; диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями МИК. Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с известным количеством противомикробных препаратов, инкубируют чашку и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением результатов с критериями CLSI — Института клинических и лабораторных стандартов.

На результаты диско-диффузионных испытаний влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами β-лактамазы. Для диско-диффузионного исследования медленнорастущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов агар Мюллера—Хинтона не подходит. При увеличении времени инкубации с медленнорастущими микроорганизмами диффундирующий антибиотик может разрушаться, что приводит к неточным результатам.

Для определения чувствительности к противомикробным препаратам, нанесённым на бумажные диски, применение среды описано в утверждённом стандарте NCCLS — Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, ныне CLSI.

Подготовка и проведение испытания

1. Используйте асептическую технику: нанесите тестовый инокулят на поверхность чашки штриховым методом, инокуляцией или поверхностным распределением.
2. При диско-диффузионном испытании равномерно распределите стандартизованную суспензию микроорганизма тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности бумажные диски с заданным количеством соответствующих противомикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашку в соответствии с условиями испытания.
5. Измерьте диаметры зон подавления роста вокруг дисков и сопоставьте результаты с критериями CLSI.

Контроль качества

Физические характеристики

• Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 200 мм с агаром Мюллера—Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-янтарный.
• Объём среды: 110 мл в одноразовой чашке диаметром 200 мм.
• pH: 7,20–7,40.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики и контроль дисков

Испытания чувствительности к антибиотикам проводят в соответствии с действующей редакцией ISO/TS 16782 и с соблюдением установленных пределов приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с рекомендациями CLSI/EUCAST.

В приведённых ниже испытаниях использовали различные диски со стандартными штаммами АТСС; зоны подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Условия и критерии также указаны согласно актуальному протоколу CLSI M6 и стандарту CLSI M100.