Готовые чашки с агаром Мюллера—Хинтона HiMedia MP173M-20PT (120 мм, 20 чашек) содержат 45 мл стерильной среды с конечным pH 7,3 ± 0,1. Среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом диффузии в агар и применяется для чистых культур, выделенных из клинических образцов.

Область применения

Среда рекомендована для определения чувствительности микроорганизмов, выделенных из клинических образцов, к антимикробным препаратам. Типы образцов: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Среда Мюллера—Хинтона применяется для диффузионного тестирования антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски. Для тестирования Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % овечьей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения заданных показателей эффективности.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Изначально состав Мюллера—Хинтона был разработан как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для выращивания этих микроорганизмов стали использовать другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам. В настоящее время среду используют для тестирования чувствительности к антимикробным препаратам.

Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов из бумажных дисков через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI. Выбор среды для этой методики обусловлен следующими характеристиками:

• хорошая воспроизводимость между партиями при тестировании чувствительности;
• низкое содержание ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина;
• способность поддерживать рост большинства неприхотливых бактериальных патогенов;
• наличие значительного объёма накопленных данных и опыта применения.

Кирби—Бауэр рекомендовали эту среду для определения чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Настой HM B и ациказа обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это оценивается по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при применении сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии антимикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон сопоставляют со значениями МИК. Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов, проводят инкубацию и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность дисков, концентрация инокулюма, pH среды и продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Методика проведения

1. Асептически нанесите исследуемый инокулюм на чашку одним из способов: штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением.
2. При тестировании методом Кирби—Бауэра равномерно распределите стандартизованную суспензию микроорганизма тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности бумажные диски, содержащие заданное количество антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашку, затем измерьте зоны подавления роста вокруг дисков.
5. Определите чувствительность, сопоставив диаметры зон со стандартами CLSI.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
• Плотность инокулюма влияет на размер зон: слишком плотный посев может привести к уменьшению зон, а слишком низкая концентрация инокулюма — к их увеличению.
• Неприхотливые в питании микроорганизмы могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
• Неприхотливые анаэробы могут не расти на этой среде.
• Поскольку результат теста зависит от антибиотических дисков, необходимо соблюдать условия их хранения, влияющие на активность препаратов.
• Результаты определения чувствительности in vitro в некоторых случаях могут не совпадать с результатами in vivo.
• Среда не подходит для диско-диффузионного тестирования медленнорастущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При увеличении времени инкубации для медленнорастущих микроорганизмов диффундирующий антибиотик может разрушаться, что приводит к неточным результатам.

Контроль качества

Ожидаемые показатели среды достигаются при использовании согласно инструкции на этикетке и в пределах срока годности при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

• Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 120 мм с агаром Мюллера—Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-янтарный.
• Объём среды: 45 мл в одноразовой чашке диаметром 120 мм.
• pH: 7,20–7,40.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.
• Культуральные характеристики и результаты тестирования чувствительности: соответствуют допустимым пределам действующей версии ISO/TS 16782. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.
• Тестирование чувствительности к антибиотикам: диски тестируют на стандартных штаммах ATCC; зоны подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Указаны протокол CLSI M6 последней редакции и стандарты действующей версии CLSI M100.
• Содержание тимина/тимидина: зоны для отмеченных символом # дисков служат показателем содержания тимина/тимидина в среде.
• Содержание двухвалентных катионов: зоны для отмеченных символом $ дисков служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.

Результаты тестирования чувствительности к антибиотикам