Готовая питательная среда Агар Мюллера-Хинтона чашка (150mm чашка) HiMedia MP173CL-50PT (50 чашек) — стерильный агар в одноразовых чашках диаметром 150 мм, по 85 мл среды в каждой. Среда предназначена для определения чувствительности выделенных из клинических образцов микроорганизмов к антимикробным препаратам и применяется для тестирования чистых культур; она не подходит для медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов методом дисковой диффузии.

Область применения

Среду используют для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом дисковой диффузии. Предназначена для выделенных из клинических образцов микроорганизмов, в том числе из мочи и кала, и рекомендована для тестирования чистых культур.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Эквивалент мясного настоя.

• Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria (1). Позднее для культивирования этих микроорганизмов появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время его используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (2).

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель согласно утверждённому стандарту CLSI (3). Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали эту среду для тестирования чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата (4). Комитет Всемирной организации здравоохранения по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов (5).

Настой HM B и ациказа обеспечивают поступление азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; содержание оценивают по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Методика проведения анализа

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; диаметры зон ингибирования сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (6, 7, 8).

1. Подготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно распределите суспензию тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности среды бумажные диски, содержащие заданные количества антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашку и измерьте зоны ингибирования вокруг каждого диска.
5. Определите чувствительность, сравнив результаты со стандартами CLSI (7).

На результаты диско-диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция исследуемыми микроорганизмами β-лактамазы (7, 8).

Подготовка и обработка образцов

Для клинических образцов соблюдайте установленные методики обращения с материалом и его обработки (10, 11).

При посеве тестового инокулята асептически выполните один из вариантов: штриховой посев, инокуляцию или поверхностное распределение по чашке. Рекомендуемая посевная доза — 50–100 КОЕ.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
• Плотность инокулята влияет на размер зоны ингибирования: слишком густой инокулят может привести к уменьшению зон, а слишком малый — к их увеличению.
• Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
• Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
• Поскольку тестирование чувствительности проводят с использованием дисков с антибиотиками, необходимо соблюдать условия их хранения: нарушение хранения может повлиять на активность препарата.
• В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.
• Агар Мюллера—Хинтона не подходит для диско-диффузионного тестирования медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При увеличении времени инкубации для медленно растущих микроорганизмов диффундирующий антибиотик может разрушаться, что приводит к неточным результатам.

Контроль качества

Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 150 мм с агаром Мюллера—Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.

Цвет среды: светло-янтарный.

Объём среды: 85 мл в одноразовой чашке диаметром 150 мм.

pH: 7,20–7,50.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики учитывают после инкубации бактериальных культур при 30–35 °C в течение 18–24 ч.

Для проверки чувствительности к антибиотикам тестировали различные диски на стандартных штаммах ATCC; зоны ингибирования измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Испытания проводили по актуальному протоколу CLSI M6 и действующим стандартам CLSI M100.

Зоны для указанных дисков служат показателем содержания тимина и тимидина в среде.

$ Зоны для указанных дисков служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.