Готовая питательная среда в чашке Агар Мюллера-Хинтона чашка (150mm чашка) HiMedia MP173CL-20PT (20 чашек) — стерильная чашка диаметром 150 мм с 85 мл агара. Среда предназначена для определения чувствительности выделенных из клинических образцов микроорганизмов к антимикробным препаратам и рекомендована для тестирования чистых культур.

Назначение

Среда предназначена для определения чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмов, выделенных из клинических образцов, включая мочу и кал.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных характеристик среды.

Эквивалент мясного настоя

Эквивалент кислотного гидролизата казеина

Принцип действия и интерпретация

Изначально состав Мюллера—Хинтона разработали как простую прозрачную агаровую среду для культивирования патогенных видов Neisseria (1). Позднее для культивирования этих микроорганизмов появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (2). Среда рекомендована для диффузии антимикробных веществ из бумажных дисков через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI (3).

Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали среду для определения чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата (4). Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов (5).

Настой HM B и ациказа обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, которое оценивают по значениям минимальной ингибирующей концентрации (MIC) для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазол/триметоприм (SXT).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата, а измеренные диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (MIC) (6, 7, 8). Стандартизованную суспензию микроорганизмов равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски, содержащие определённое количество антимикробных препаратов, инкубируют чашки и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением с критериями CLSI (7).

На результаты диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами бета-лактамазы (7, 8).

Методика проведения анализа

1. Асептически нанесите на чашку тестовый инокулят в количестве 50–100 КОЕ: штриховым методом, инокуляцией или поверхностным распределением.
2. Для диско-диффузионного теста приготовьте стандартизованную суспензию микроорганизма и равномерно распределите её тампоном по всей поверхности среды.
3. Разместите на поверхности бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашки, затем измерьте диаметры зон подавления роста вокруг каждого диска.
5. Определите чувствительность, сопоставив измеренные зоны с критериями CLSI.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чистых культур.
• Плотность инокулята влияет на размер зоны: слишком плотный инокулят может привести к уменьшению зон, а слишком низкая концентрация — к их увеличению.
• Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
• Требовательные анаэробы могут не расти на среде.
• При диско-диффузионном определении чувствительности результат зависит от антибиотических дисков; для сохранения их активности необходимо соблюдать надлежащие условия хранения.
• В некоторых случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.
• Агар Мюллера—Хинтона не подходит для диско-диффузионного тестирования медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При увеличении времени инкубации медленно растущих микроорганизмов диффундирующий антибиотик может разрушаться, что приводит к неточным результатам (9).

Отбор и обработка образцов

Для работы с клиническими образцами соблюдайте установленные методы обращения с материалом (10, 11).

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке и в пределах срока годности, если продукт хранился при рекомендованной температуре.

• Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 150 мм с агаром Мюллера—Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-янтарный.
• Объём среды: 85 мл в чашке диаметром 150 мм.
• pH: 7,20–7,50.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.
• Культуральные характеристики бактериальных культур оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 18–24 ч.
• Для проверки чувствительности к антибиотикам тестировали различные диски на стандартных штаммах ATCC; зоны подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Условия указаны в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и действующими стандартами CLSI M100.
• Зоны для дисков, отмеченных #, служат показателем содержания тимина/тимидина в среде.
• Зоны для дисков, отмеченных $, служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.