Готовая питательная среда в чашке — Агар Мюллера-Хинтона чашка (100 мм чашка) HiMedia MP173C-50PT (50 чашек), содержащая 40 мл агара на чашку и предназначенная для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда применяется для тестирования чистых культур клинических изолятов методом диффузии в агар; для прихотливых микроорганизмов может потребоваться добавление крови.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмов, выделенных из клинических образцов. Применяется для диффузионного тестирования с дисками, содержащими антимикробные препараты.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Формула агара Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования этих микроорганизмов стали применять другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время среда используется для определения чувствительности к антимикробным препаратам.

Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI. CLSI выбрал агар Мюллера—Хинтона по следующим причинам:

• хорошая воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от партии к партии;
• низкое содержание ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддержка роста большинства неприхотливых бактериальных патогенов;
• наличие большого объёма данных и опыта применения, подтверждающих характеристики среды.

Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали эту среду для тестирования чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска высокой концентрации. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности одобрил агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов. Для тестирования чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % овечьей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Настой HM B и ациказа обеспечивают поступление азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это контролируется по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при применении сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агар. Используются диски с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон ингибирования сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК). Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды.

Затем на поверхность среды помещают бумажные диски с известным количеством антимикробных препаратов, проводят инкубацию и измеряют зоны ингибирования вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI. На результаты диффузионного теста влияют глубина агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами бета-лактамазы.

Методика проведения анализа

1. Используйте для тестирования чистую культуру.
2. Подготовьте стандартизованную суспензию микроорганизма и равномерно распределите её тампоном по всей поверхности чашки.
3. Поместите на поверхность среды бумажные диски с заданным количеством антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте посев.
5. Измерьте диаметры зон ингибирования вокруг дисков.
6. Определите чувствительность, сопоставив измеренные зоны с применимыми стандартами CLSI.

Для проверки характеристик среды при тестировании чувствительности использованы стандартные штаммы АТСС; условия инкубации и стандартные диаметры зон указаны в таблице.

Технические характеристики и контроль качества

Контроль чувствительности к антибиотикам

Для стандартных штаммов АТСС проверяли различные диски и измеряли зоны ингибирования после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Указано соответствие последнему протоколу CLSI M6 и действующему стандарту CLSI M100.

Зоны вокруг указанных дисков являются показателями содержания тимина/тимидина (#) и двухвалентных катионов ($) в среде.