Готовая питательная среда в чашках — Агар Мюллера-Хинтона чашка HiMedia MP173-50PT (50 чашек) с объёмом среды 25 мл в чашке диаметром 90 мм. Предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам; применяется для чистых культур, выделенных из клинических образцов.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмов, выделенных из клинических образцов. Типы образцов: чистые культуры, выделенные, например, из мочи, кала и крови.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

• Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria (1). Позднее для культивирования этих микроорганизмов появились другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время его используют как тест-среду для определения чувствительности к антимикробным препаратам (2).

Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI (3). CLSI выбрал агар Мюллера—Хинтона по следующим причинам:

1. Среда обеспечивает хорошую воспроизводимость между партиями при тестировании чувствительности.
2. Содержание ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина низкое.
3. Среда поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Накоплены значительный объём данных и опыт применения среды (4).

Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали эту среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата (5). Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря его воспроизводимости (6). Для тестирования чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей крови и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Настой HM B и Acicase обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде; при его гидролизе образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты выбраны с низким содержанием тимина и тимидина, что оценивают по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ из бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; диаметры зон подавления роста соотносят со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (7, 1, 2). Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды.

На поверхность среды помещают бумажные диски, содержащие заданное количество антимикробного препарата, затем чашки инкубируют и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI (4). На результаты диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами бета-лактамаз (4, 8).

Агар Мюллера—Хинтона не подходит для диско-диффузионного тестирования медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и неточным результатам (9).

Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов из бумажных дисков через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом NCCLS (Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам), ныне CLSI (Института клинических и лабораторных стандартов) (10).

Методика применения

1. Асептически нанесите тестируемый инокулят на поверхность чашки штриховым методом, инокуляцией или поверхностным распределением.
2. Для диско-диффузионного теста равномерно распределите стандартизованную суспензию микроорганизма тампоном по всей поверхности среды.
3. Поместите на поверхность среды бумажные диски с заданным количеством антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашку, затем измерьте диаметры зон подавления роста вокруг дисков.
5. Определите чувствительность, сопоставив диаметры зон со стандартами CLSI.

Контроль качества

Внешний вид и характеристики среды

• Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 90 мм с агаром Мюллера—Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-янтарный.
• Объём среды: 25 мл в чашке диаметром 90 мм.
• pH: 7,20–7,40.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Испытания чувствительности к антибиотикам проводят в соответствии с действующей редакцией ISO/TS 16782 и установленными критериями приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с рекомендациями CLSI и EUCAST.

Испытание чувствительности к антибиотикам

Различные диски испытывали на стандартных штаммах ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Испытания проводили по последнему протоколу CLSI M6 и стандартам действующей редакции CLSI M100.

Зоны вокруг указанных дисков являются показателями содержания тимина/тимидина (#) или двухвалентных катионов ($) в среде.