Готовая питательная среда в чашке — Агар Мюллера-Хинтона чашка HiMedia MP173-20PT (20 чашек) — стерильный агар в одноразовых чашках диаметром 90 мм. Среду применяют для определения чувствительности чистых культур микроорганизмов к антимикробным препаратам методом дисковой диффузии; она не предназначена для тестирования медленнорастущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмов, выделенных из клинических образцов. Тип образца — чистая культура, выделенная, например, из мочи, кала или крови.

Состав

Формула скорректирована и стандартизована для обеспечения заданных характеристик.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация результатов

Формуляция агара Мюллера-Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для их культивирования появились другие среды, однако агар Мюллера-Хинтона стал широко применяться для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам. В настоящее время среду используют для тестирования чувствительности к антимикробным препаратам.

Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель согласно утверждённому стандарту CLSI. CLSI выбрал агар Мюллера-Хинтона по следующим причинам:

• среда обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от партии к партии;
• содержит низкие количества ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий;
• накоплены значительные данные и опыт применения среды.

Кирби—Бауэр и соавторы рекомендовали эту среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера-Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов. Для тестирования чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы агар Мюллера-Хинтона с 5 % бараньей крови и агар Мюллера-Хинтона с гемоглобином.

Настой HM B и ациказа обеспечивают поступление азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это контролируют по значениям минимальной подавляющей концентрации (МПК) для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии антимикробных веществ с бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК). Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с известным количеством антимикробных препаратов, чашки инкубируют и измеряют зоны ингибирования вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением результатов с критериями CLSI.

На результаты тестирования методом дисковой диффузии влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция тестируемыми микроорганизмами бета-лактамазы. Диффузию антимикробных препаратов через агаровый гель проводят согласно утверждённому стандарту NCCLS (Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам), ныне CLSI (Института клинических и лабораторных стандартов).

Методика проведения

1. Используйте только чистую культуру. Приготовьте стандартизованную суспензию микроорганизма и тампоном равномерно нанесите её на всю поверхность агара.
2. Поместите на поверхность среды бумажные диски, содержащие заданные количества антимикробных препаратов.
3. Инкубируйте чашку.
4. Измерьте диаметры зон ингибирования вокруг дисков.
5. Определите чувствительность, сопоставив диаметры зон с критериями CLSI.

Подготовка и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте установленные рекомендации по обращению с пробами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

• Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
• Плотность инокулята влияет на размер зоны: при чрезмерно плотном инокуляте зоны могут быть меньше, а при недостаточном — больше.
• Требовательные к условиям культивирования микроорганизмы могут не расти на этой среде и могут требовать добавления крови.
• Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
• Для тестирования применяют диски с антибиотиками; необходимо соблюдать надлежащие условия их хранения, поскольку неправильное хранение может повлиять на активность препарата.
• Результаты тестирования чувствительности к антибиотикам in vitro в некоторых случаях могут не совпадать с результатами in vivo.
• Среда не подходит для тестирования медленнорастущих микроорганизмов методом дисковой диффузии. Продление инкубации для таких микроорганизмов может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и неточным результатам.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке и в пределах срока годности при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

• Внешний вид: стерильные одноразовые чашки диаметром 90 мм с агаром Мюллера-Хинтона; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: светло-янтарный.
• Объём среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.
• pH: 7,20–7,40.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.
• Культуральные характеристики: тесты чувствительности к антибиотикам проводят в соответствии с действующей ISO/TS 16782 и установленными пределами приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI/EUCAST.

Тест чувствительности к антибиотикам

Различные диски проверяли на стандартных штаммах ATCC; зоны ингибирования измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч согласно последнему протоколу CLSI M6 и действующему стандарту CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны для отмеченных символом # дисков указывают на содержание тимина/тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Зоны для отмеченных символом $ дисков указывают на содержание двухвалентных катионов в среде.

В таблице приведены характеристики роста и стандартные диаметры зон ингибирования.