Готовые чашки с агаром — Агар Мюллера-Хинтона No. 2 чашка HiMedia MP1084-50PT (50 чашек) — питательная среда для определения чувствительности бактерий к антимикробным препаратам. Среда предназначена для тестирования быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий из клинических образцов; для прихотливых микроорганизмов она не рекомендована.

Назначение и область применения

Агар Мюллера—Хинтона No. 2 применяют для определения чувствительности к антимикробным препаратам быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Для тестирования используют чистые культуры; среда не предназначена для прихотливых микроорганизмов и прихотливых анаэробов.

Типы образцов: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована с учётом параметров эффективности.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Цель теста на чувствительность — прогнозировать на основании исследования in vitro вероятность успешного лечения инфекции у пациента конкретным антимикробным препаратом (1). Изначально рецептура агара Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная среда для культивирования патогенных видов Neisseria (2). Позднее для культивирования этих микроорганизмов стали применять другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (3). Среда рекомендована для диффузии антимикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом NCCLS (Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам), ныне CLSI (Института клинических и лабораторных стандартов) (4). CLSI выбрал агар Мюллера—Хинтона по следующим причинам: воспроизводимость результатов тестирования между партиями среды; низкое содержание ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина; способность поддерживать рост большинства неприхотливых бактериальных патогенов; наличие большого объёма данных и опыта применения среды (1).

Агар Мюллера—Хинтона No. 2 используют для тестирования быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий из клинических образцов. Kirby—Bauer и соавторы рекомендовали эту среду для проведения тестов на чувствительность к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата (5). Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря его воспроизводимости (6).

Среда разработана с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы согласно рекомендациям CLSI (3). Среда не рекомендована для прихотливых микроорганизмов. Тимин и тимидин ингибируют действие сульфаниламидов и триметоприма (7, 8), а кальций и магний влияют на активность аминогликозидных антибиотиков (9, 10).

Сухой остаток настоя HM B и ациказа обеспечивают поступление азотистых соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид в отношении токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с учётом низкого содержания тимина и тимидина; это оценивают по значениям минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола с триметопримом (SXT). Концентрации ионов кальция и магния скорректированы до рекомендованных CLSI значений, чтобы обеспечить соответствующие результаты определения МИК аминогликозидов для Pseudomonas aeruginosa (3).

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ из пропитанных ими бумажных дисков в агар. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; диаметр зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (2, 3, 11). Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с заданным количеством антимикробных препаратов, чашки инкубируют и измеряют зоны подавления роста вокруг дисков.

Результаты определения чувствительности сравнивают с критериями CLSI (12), ISO (15) и EUCAST (16–17). На результаты диффузионного теста влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция β-лактамазы тестируемыми микроорганизмами (1, 12).

Методика приготовления и использования

На чашку с агаром асептически наносят тестовый инокулят одним из способов: штриховым посевом, внесением инокулята или распределением по поверхности.

Для диффузионного теста по методу Kirby—Bauer:

1. Равномерно распределите стандартизованную суспензию микроорганизма тампоном по всей поверхности среды.
2. Поместите на поверхность среды бумажные диски, пропитанные заданным количеством антимикробных препаратов.
3. Инкубируйте чашки.
4. Измерьте зоны подавления роста вокруг каждого диска и сопоставьте диаметры зон с критериями интерпретации.

Плотность инокулята влияет на размер зоны: слишком плотный инокулят может уменьшить зоны, а слишком низкая плотность — увеличить их.

Обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методы обращения с материалом, предусмотренные установленными руководствами (13, 14). После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулята может влиять на размер зоны: чрезмерно плотный инокулят может приводить к уменьшению зон, а слишком низкая плотность — к их увеличению.
3. Прихотливые микроорганизмы могут не расти на этой среде; для их культивирования может потребоваться добавление крови.
4. Прихотливые анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку чувствительность к антимикробным препаратам определяют с помощью антибиотических дисков, необходимо обеспечить надлежащие условия хранения дисков; их нарушение может повлиять на активность препарата.
6. В некоторых случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке и в пределах срока годности при хранении в рекомендованных условиях.

Внешний вид: стерильная чашка с агаром Мюллера—Хинтона No. 2 в одноразовой чашке диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
Цвет среды: светло-янтарный.
Объём среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.
pH: 7,20–7,40.
Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Антибиотикочувствительные тесты проводят в соответствии с действующей ISO/TS 16782 и установленными критериями приёмки (15). Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Различные диски тестируют на стандартных штаммах ATCC; зоны подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Проверку проводят согласно актуальному протоколу CLSI M6 и действующему стандарту CLSI M100.

Отмеченные символом # зоны для соответствующих дисков служат показ