Готовая питательная среда в чашках Агар Мюллера-Хинтона No. 2 чашка HiMedia MP1084-20PT (20 чашек) предназначена для тестирования чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом диффузии в агар. Среда применяется для быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий из клинических образцов; для требовательных микроорганизмов не рекомендована.

Назначение и принцип применения

Среду используют для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Метод позволяет по результатам испытания in vitro оценить вероятность успешного лечения инфекции пациента конкретным препаратом.

Агар Мюллера-Хинтона первоначально разработали как простую прозрачную среду для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования этих бактерий появились другие среды, однако агар Мюллера-Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам. В настоящее время среду используют для испытаний чувствительности к антимикробным препаратам.

Среда № 2 предназначена для тестирования быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Метод диффузии основан на перемещении антимикробных веществ из пропитанных препаратом бумажных дисков в агаровый гель. Используют диски с одной концентрацией антимикробного вещества; диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации (MIC).

Метод дисковой диффузии рекомендован для среды Мюллера-Хинтона стандартом CLSI. Метод Кирби—Бауэра рекомендован для испытаний с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера-Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов с учётом воспроизводимости результатов.

CLSI выбрал эту среду по следующим причинам:

• хорошая воспроизводимость результатов испытаний чувствительности между партиями;
• низкое содержание ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддержка роста большинства неприхотливых бактериальных патогенов;
• наличие большого объёма данных и опыта применения.

Для среды установлено низкое содержание тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Тимин и тимидин ингибируют действие сульфаниламидов и триметоприма, а ионы кальция и магния влияют на активность аминогликозидных антибиотиков. Содержание тимина и тимидина подбирают по значениям MIC для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола/триметоприма (SXT). Концентрации кальция и магния корректируют для получения соответствующих значений MIC при испытаниях аминогликозидов на Pseudomonas aeruginosa.

Сухие вещества настоя HM B и Acicase служат источниками азотсодержащих соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде; при гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Методика проведения анализа

1. Приготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно нанесите суспензию тампоном на всю поверхность среды.
3. Разместите на поверхности агара бумажные диски, пропитанные заданным количеством антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте чашки.
5. Измерьте диаметры зон подавления роста вокруг дисков и сопоставьте результаты с применимыми стандартами.

Результаты чувствительности определяют в соответствии со стандартами CLSI, ISO и EUCAST. На результаты диско-диффузионных испытаний влияют глубина слоя агара, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция исследуемыми микроорганизмами бета-лактамазы.

Образцы и обращение с ними

Тип образца: чистые культуры, выделенные из клинических образцов, включая мочу, кал и кровь.

При работе с клиническими образцами соблюдайте установленные правила их сбора и обращения. Среда предназначена для тестирования только чистых культур. Использованные материалы, загрязнённые образцами или культурами, перед утилизацией стерилизуйте автоклавированием.

Состав

Состав приведён на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизована с учётом рабочих характеристик.

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Контроль качества

Внешний вид: стерильный агар Мюллера-Хинтона № 2 в одноразовых чашках диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.

Цвет среды: светло-янтарный.

Объём среды: 25 мл в одноразовой чашке диаметром 90 мм.

pH: 7,20–7,40.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики: испытания чувствительности к антибиотикам выполняют в соответствии с действующей редакцией ISO/TS 16782 и установленными в ней пределами приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют по руководствам CLSI и EUCAST.

Испытание чувствительности к антибиотикам: диски проверяли на стандартных штаммах ATCC; зоны подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Испытания выполняли по последнему протоколу CLSI M6 и действующему стандарту CLSI M100.

Для указанного ниже контроля культуральный рост оценивают при режимах инкубации, приведённых в таблице. Зоны для дисков, отмеченных #, характеризуют содержание тимина и тимидина в среде. Зоны для дисков, отмеченных $, характеризуют содержание двухвалентных катионов.