Готовая чашечная питательная среда Deoxycholate цитрат агар в чашке HiMedia MP065-50PT (50 чашек) предназначена для выделения кишечных патогенов, прежде всего Salmonella и Shigella. Применяется для исследования клинических и пищевых образцов; для выделения Shigella рекомендуется использовать менее ингибирующую среду.

Назначение

Среда предназначена для выделения кишечных патогенов, в том числе видов Salmonella и Shigella, из пищевых образцов. Может использоваться при исследовании клинических образцов; для рутинного анализа кала и мочи рекомендуется применять её совместно с другими средами, например агаром МакКонки (M082) и висмут-сульфитным агаром (M027).

Состав

Состав среды, г/л; окончательное значение pH приведено при 25 °C.

Формула скорректирована и стандартизована для соответствия заданным характеристикам.

Эквивалентно сухим веществам сердечного настоя.

Методика проведения анализа

1. Асептически нанесите на чашку исследуемый инокулят с посевной дозой 50–100 КОЕ одним из способов: штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением.

Принцип действия

Среда приготовлена по модифицированной формуле Лейфсона (1) и предназначена для выделения кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых продуктов (2). По сравнению с дезоксихолатным агаром среда обладает умеренно более высокой селективностью для кишечных патогенов благодаря повышенным концентрациям цитрата и дезоксихолатных солей. Селективность позволяет вносить достаточно большие посевные дозы без риска чрезмерного роста другой микрофлоры, подавляющего рост Shigella и Salmonella. Для выделения Shigella рекомендуется выбирать менее ингибирующую среду (3).

Дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 подавляет грамположительные бактерии. Цитратные соли в концентрации, предусмотренной составом, подавляют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры. Сухие вещества сердечного настоя служат источником углерода и азота; этот компонент обеспечивает более выраженное подавление колиформных бактерий, чем экстракт или простой пептон. Протеозопептон обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами. Дезоксихолат натрия, цитрат натрия и цитрат аммонийного железа подавляют или значительно ограничивают рост колиформных и грамположительных бактерий.

Лактоза используется для дифференциации кишечных бацилл: ферментирующие лактозу бактерии образуют красные колонии, неферментирующие — бесцветные. Колиформные бактерии, если они присутствуют, образуют розовые колонии. Расщепление лактозы подкисляет среду вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный приобретает красную окраску. Обычно вокруг таких колоний также формируется мутная зона осаждённой дезоксихолевой кислоты. В кислой среде дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным; краситель выпадает из раствора, после чего осаждается дезоксихолат (1).

Восстановление цитрата аммонийного железа до сульфида железа проявляется образованием чёрного сульфида железа. Виды Salmonella и Shigella не ферментируют лактозу. Salmonella может продуцировать H₂S, образуя бесцветные колонии с чёрным центром или без него.

Сочетание цитрата и железа при нагревании оказывает выраженное гидролизующее действие на агар, из-за чего среда становится мягкой и неэластичной. После автоклавирования агар размягчается, и штриховой посев становится практически невозможен.

Типы образцов

• Клинические образцы.
• Пищевые образцы.

Сбор и обработка образцов

Для клинических образцов соблюдайте установленные рекомендации по обращению с материалом (4, 5). Сбор и обработку пищевых образцов выполняйте в соответствии с применимыми рекомендациями (5). После использования загрязнённые материалы необходимо автоклавировать перед утилизацией.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют неодинаковые требования к росту и могут демонстрировать на среде различные картины роста.
• Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для исследования конкретных микроорганизмов, не перечисленных в сертификате, пользователю рекомендуется самостоятельно подтвердить пригодность среды с учётом специфики применения.
• Для подтверждения вида требуется дальнейшая биохимическая идентификация.
• Повышение концентрации дезоксихолата натрия до 0,1 % и выше подавляет рост Salmonella Gallinarum.
• Поверхностные колонии неферментирующих лактозу бактерий могут адсорбировать небольшое количество красителя из среды и приобретать розоватый оттенок; такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформные бактерии.

Контроль качества

• Внешний вид: стерильный дезоксихолат-цитратный агар в одноразовой чашке диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет среды: красновато-оранжевый.
• Объём среды: 25 мл в чашке диаметром 90 мм.
• Реакция среды: