Готовая питательная среда «Агар с фиолетовым красным и жёлчью чашка HiMedia MP049-20PT (20 чашек)» — селективный агар для колиформных бактерий. Среда предназначена для выделения, обнаружения и количественного определения коли-аэрогенезных бактерий в воде, молоке и молочных продуктах, пищевых продуктах и клинических образцах; окончательная идентификация требует дополнительных биохимических тестов.

Назначение

Среда применяется для селективного выделения, обнаружения и количественного определения коли-аэрогенезных бактерий в воде, молоке и других молочных продуктах, пищевых продуктах и клинических образцах.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизована для обеспечения заданных характеристик среды.

Принцип действия

К группе колиформных бактерий относятся несколько родов семейства Enterobacteriaceae. Исторически определение этой группы основывалось на способности бактерий ферментировать лактозу. К колиформным относят аэробные и факультативно-анаэробные грамотрицательные неспорообразующие палочковидные бактерии, которые ферментируют лактозу с образованием газа и кислоты в течение 48 ч при 35 °C (1, 2). Исследование пищевых продуктов, ингредиентов и сырья на наличие маркерных групп, таких как колиформные бактерии, относится к распространённым видам анализов.

Агар с фиолетовым красным и жёлчью — модификация исходной рецептуры МакКонки (1), предназначенная для количественного определения коли-аэрогенезной группы бактерий. Селективность обеспечивают ингибирующие компоненты — кристаллический фиолетовый и жёлчные соли; лактоза и нейтральный красный образуют индикаторную систему. Рост многих нежелательных микроорганизмов подавляется, что позволяет предварительно идентифицировать целевые бактерии. Микроорганизмы, быстро ферментирующие лактозу, образуют фиолетовые колонии, окружённые фиолетовыми ореолами. Неферментирующие микроорганизмы и микроорганизмы, ферментирующие лактозу с задержкой, образуют бледные колонии с зеленоватыми зонами (3).

Среда VRBA рекомендована APHA (4, 5) и ISO (9). Селективность можно повысить инкубацией в анаэробных условиях и/или при повышенной температуре — 42 °C и выше (6–8).

Пептон и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, витаминов и других необходимых для роста питательных веществ. Лактоза является сбраживаемым углеводом; её утилизация приводит к образованию кислот, которые обнаруживаются индикатором нейтральным красным. Смесь кристаллического фиолетового и жёлчных солей подавляет сопутствующую грамположительную и неспецифическую микрофлору. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Среда не является полностью специфичной для энтеробактерий: сопутствующие бактерии также могут давать аналогичную реакцию. Для подтверждения идентификации необходимы дополнительные биохимические тесты (5).

Методика проведения анализа

1. Асептически нанесите на чашку исследуемый инокулят с посевной дозой 50–100 КОЕ одним из способов: штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением.

Образцы и обращение с ними

Типы образцов: клинические образцы (кал), пищевые продукты и молочные образцы, вода.

• Для пищевых продуктов и молочных образцов соблюдайте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно руководствам (3, 4, 5).
• Для проб воды соблюдайте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативам (10).
• Клинические образцы обрабатывайте в соответствии с установленными руководствами (11, 12).
• После использования загрязнённые материалы перед утилизацией стерилизуйте в автоклаве.

Контроль качества

• Внешний вид: стерильный агар с фиолетовым красным и жёлчью в одноразовой чашке диаметром 90 мм; поверхность гладкая, без чёрных частиц, трещин и пузырьков.
• Цвет: красновато-фиолетовая среда.
• Объём среды: 25 мл в чашке диаметром 90 мм.
• Реакция: 7,20–7,60.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

• Соответствующие номера WDCM.

Ранее назывался Enterobacter aerogenes.

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют неодинаковые требования к росту и могут демонстрировать на среде вариабельные характеристики.
• Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для проверки конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований.
• Для уменьшения конденсации рекомендуется хранить чашки при 24–30 °C.
• Среда предназначена для селективного выделения, однако для подтверждения результата необходимо дополнительное биохимическое и серологическое тестирование.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения после получения: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Для уменьшения конденсации чашки рекомендуется хранить при 24–30 °C.

Меры предосторожности и утилизация

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального применения. Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку. Используйте защитные перчатки, одежду, очки и средства защиты лица. При работе с образцами и культурами соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности для клинических образцов. Рекомендации по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Использованные или непригодные препараты утилизируйте безопасным способом — автоклавированием и/или сжиганием. Соблюдайте установленные лабораторные процедуры утилизации инфекционных материалов. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лаборат