HiMedia MM331-100G Висмут-сульфитный агар Вильсона и Блэра (среда 10)

Питательная агаровая среда HiMedia MM331-100G Висмут-сульфитный агар Вильсона и Блэра (среда 10) — сухая порошкообразная среда для селективного выделения видов Salmonella. Среда предназначена для селективного пересевания Salmonella после обогащения и позволяет выделять лактозоферментирующие штаммы, поскольку лактоза не является ферментируемым субстратом.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для селективного выделения видов Salmonella, особенно Salmonella Typhi, из клинических образцов в соответствии с Индийской фармакопеей 2014 года. Также применяется для селективного пересевания Salmonella после обогащения в бульоне обогащения Salmonella Раппапорта—Вассилиадиса.

Salmonella — род грамотрицательных энтеробактерий, часто связанный с пищевыми инфекциями и являющийся возбудителем брюшного тифа и паратифозной лихорадки. Виды Salmonella выделяются от людей и животных; описано более 2000 сероваров, каждый из которых характеризуется собственной специфичностью к хозяину.

Люди являются единственным известным природным резервуаром серовара Salmonella Typhi и сероваров Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B и Salmonella Paratyphi C. Передача микроорганизма возможна фекально-оральным путём через загрязнённую воду, пищу или при контакте между людьми при недостаточном соблюдении правил личной гигиены.

Среда Вильсона и Блэра, сформулированная Wilson и Blair, особенно эффективна для выделения S. Typhi. Селективная рецептура является модификацией бисмут-сульфитного реагента, описанного Hajna и Perry. Среда обладает высокой селективностью в отношении Salmonella и подавляет колиформные микроорганизмы и Proteus. Отдельные штаммы колиформных микроорганизмов могут расти с образованием тускло-зелёных или коричневых колоний, но без окружающего металлического блеска.

В отличие от дифференциальных сред, содержащих лактозу, среда позволяет выделять лактозоферментирующие штаммы Salmonella, поскольку лактоза не используется в качестве ферментируемого субстрата.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Пептон и мясной экстракт B обеспечивают среду азотистыми и углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими питательными веществами для роста микроорганизмов.

Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды. Краситель бриллиантовый зелёный подавляет все грамположительные бактерии. Глюкоза является ферментируемым углеводом.

Бисмут — тяжёлый металл, подавляющий большинство грамотрицательных кишечных палочек, за исключением Salmonella. В присутствии бисмут-аммоний-цитрата и глюкозы виды Salmonella восстанавливают цитрат железа с образованием сульфида железа, что проявляется формированием колоний чёрного цвета. Динатрий гидрофосфат эффективно буферирует среду.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 4,5 г части A в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм — приблизительно 0,10 МПа — и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Суспендируйте 5,6 г части B — бисмут-сульфит-глюкозо-фосфатной смеси, раствор (i) — в 20 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды.
5. Кипятите раствор части B до полного растворения всех компонентов.
6. Суспендируйте 0,045 г части C — смеси цитрата железа и бриллиантового зелёного, раствор (ii) — в 4,5 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды.
7. Асептически смешайте 20 мл части B и 4,5 мл части C со 100 мл предварительно расплавленного стерильного питательного агара — части A.
8. Охладите приготовленную смесь до 60 °C.
9. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Указания по приготовлению приведены в соответствии с действующей редакцией фармакопеи. Установленный срок годности соответствует этой редакции; пользователь должен проверить совместимость методики с последним изданием фармакопеи.

Контроль качества

Внешний вид компонентов

• Часть A: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Часть B: однородный сыпучий порошок от белого до почти белого цвета.
• Часть C: однородные гранулы зелёного цвета.

Гелеобразование

Гель плотный, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления частей B и C к части A в чашках Петри образуется гель зеленовато-жёлтого цвета с непрозрачностью.

Культуральный отклик

Определение ростовых характеристик проводят в соответствии с методом Индийской фармакопеи. Культуральный отклик оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч. Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным на предварительно испытанной и одобренной партии среды, должен наблюдаться при заданной температуре не позднее минимального времени, указанного для инкубации, при инокуляции ≤100 КОЕ: 30–35 °C в течение ≤24 ч.

Индикаторные свойства

Колонии должны быть сопоставимы по внешнему виду и индикаторной реакции с колониями, ранее полученными на предварительно испытанной и одобренной партии среды, при заданной температуре в течение периода, указанного в диапазоне, при