HiMedia MM021-500G Трехсахарный железный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia MM021-500G Трехсахарный железный агар в форме сухого порошка содержит 64,42 г обезвоженной среды на 1 л готовой среды. Трехсахарный железный агар применяют для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae и грамотрицательных бацилл по ферментации углеводов, образованию газа и сероводорода.

Назначение и область применения

Трехсахарный железный агар используют для дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae и идентификации грамотрицательных бацилл. Среду применяют совместно с мочевинным агаром или бульоном (M112/MM111) для различения видов Salmonella и Proteus.

Среда соответствует рекомендации Индийской фармакопеи (IP) для идентификации грамотрицательных бацилл. Указания по приготовлению приведены в соответствии с действующим изданием фармакопеи; установленный срок годности соответствует требованиям этого издания.

Состав

Масса компонентов указана в граммах на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 64,42 г сухой обезвоженной среды — эквивалентную массу на 1 л среды — и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте при давлении 10 фунтов — ориентировочно 0,069 МПа — при температуре 115 °C в течение 30 мин или по валидированному циклу стерилизации.
5. Дайте среде застыть в скошенном положении, сформировав столбик длиной около 2,5 см.

Принцип действия и интерпретация

Трехсахарный железный агар первоначально предложили Sulkin и Willett, а затем модифицировал Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда соответствует рекомендации Индийской фармакопеи для идентификации грамотрицательных бацилл.

Функции компонентов среды:

• пептон, дрожжевой и мясной экстракты обеспечивают азотистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстрозы моногидрат являются ферментируемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы железа(III) или железа(II) образуют индикаторную систему для выявления H₂S;
• тиосульфат натрия также инактивирует галогены и может снижать их токсичность в исследуемой пробе, если они присутствуют при проведении испытаний на микробиологические пределы;
• феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие декстрозы моногидрат, образуют различные кислоты, изменяющие цвет среды с красного на жёлтый. В области столбика образуется больше кислот вследствие ферментации, чем в скошенной части, где преобладает дыхание. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты, присутствующей в столбике.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислая жёлтая нижняя часть после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует декстрозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно в дополнение к декстрозе, образуют большое количество кислоты. В этой области pH не возвращается к исходному значению, поэтому скошенная часть и столбик остаются кислыми.

Образование газа выявляют по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Газом является CO₂.

Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. H₂S вступает в реакцию с ионами железа(III) солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа(II). Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются декстроза и сахароза, или декстроза и лактоза, или все три сахара — декстроза, лактоза и сахароза.
• Пузырьки или трещины: образование газа.
• Чёрный осадок: образование H₂S.

Некоторые представители семейства Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительной реакции на H₂S на трёхсахарном железном агаре. Некоторые бактерии способны образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на трёхсахарном железном агаре. Это может быть связано с тем, что утилизация сахарозы в трёхсахарном железном агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность готовой среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Испытание на ростовые свойства

Испытание ростовых свойств проводят в соответствии с требованиями Индийской фармакопеи.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

Храните сухую среду в плотно закрытой упаковке при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Техническое отличие метод