HiMedia MM021-100G Трехсахарный железный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia MM021-100G Трехсахарный железный агар — обезвоженный порошок массой 100 г для приготовления дифференциальной среды. Среда предназначена для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae и грамотрицательных бацилл по ферментации углеводов, газообразованию и образованию H₂S; для разграничения Salmonella и Proteus применяется параллельно с мочевинным агаром или бульоном.

Назначение

Трёхсахарный железный агар (TSI) применяется для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae и грамотрицательных бацилл по следующим признакам:

• ферментация декстрозы, лактозы и сахарозы;
• изменение реакции среды в скошенной части и столбике;
• образование газа;
• образование сероводорода H₂S.

Среду следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном (M112/MM111) для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Состав

Состав обезвоженной среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 64,42 г обезвоженной среды, что соответствует эквивалентной массе среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
4. Распределите среду по пробиркам.
5. Стерилизуйте при давлении 10 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,069 МПа или 0,69 бар, при 115 °C в течение 30 мин либо по валидированному циклу стерилизации.
6. Дайте среде застыть в виде скошенного агара со столбиком длиной около 2,5 см.

Указания по приготовлению соответствуют действующей редакции применяемой фармакопеи. Указанный срок годности связан с требованиями этой редакции фармакопеи.

Принцип и интерпретация

Трёхсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и позднее модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Состав среды соответствует рекомендации Индийской фармакопеи (IP) для идентификации грамотрицательных бацилл.

Пептон, дрожжевой экстракт и мясной экстракт обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Лактоза, сахароза и декстрозы моногидрат являются ферментируемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для выявления H₂S. Тиосульфат натрия также инактивирует галогены и может снижать их токсичность в исследуемой пробе, если они присутствуют при проведении микробиологических испытаний. Феноловый красный используется как индикатор pH.

Микроорганизмы, ферментирующие декстрозы моногидрат, образуют различные кислоты, изменяющие цвет среды с красного на жёлтый. В столбике выделяется больше кислот в результате ферментации, чем в скошенной части в результате дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислая жёлтая реакция в столбике после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует декстрозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно наряду с декстрозой, образуют большое количество кислоты. В соответствующей области pH не возвращается к исходному значению, поэтому скошенная часть и столбик становятся кислыми.

Газообразование выявляют по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа CO₂. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. H₂S взаимодействует с ионами железа железосодержащих солей с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Сводная интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются декстроза и сахароза, либо декстроза и лактоза, либо все три сахара — декстроза, лактоза и сахароза.
• Пузырьки или трещины: образование газа.
• Чёрный осадок: образование газа H₂S.

Некоторые представители семейства Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительную реакцию на H₂S на TSI-агаре. Некоторые бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на TSI-агаре. Это может происходить потому, что утилизация сахарозы в TSI-агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

В отличие от железного агара Клиглера, трёхсахарный железный агар содержит сахарозу, поэтому результаты выявления H₂S могут различаться для одного и того же микроорганизма.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Испытание на стимулирование роста

Испытание на стимулирование роста проводят в соответствии с Индийской фармакопеей (IP).

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.