HiMedia MH118-5KG Агар с маннитом и солью

Питательная агаризованная среда HiMedia MH118-5KG Агар с маннитом и солью с содержанием хлорида натрия 7,5 %. Среда предназначена для селективного выделения стафилококков из фармацевтических образцов, при этом хранение требуется в плотно закрытой ёмкости при 10–30 °C в сухом месте.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения стафилококков из фармацевтических продуктов при проведении испытаний на микробиологические пределы по гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Тип образца: фармацевтические образцы.

Среда также применяется для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов.

Состав

Масса продукта: 5 кг.

Состав, г/л:

¹ Пептический перевар животной ткани.
² Панкреатический перевар казеина.
³ Эквивалент мясного экстракта.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными параметрами эффективности.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 111,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин либо по валидированному циклу стерилизации.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Особенности хранения сухой среды

Продукт содержит 7,5 % хлорида натрия. При многократном контакте с воздухом и поглощении влаги хлорид натрия склонен к образованию комков, поэтому среду следует хранить в плотно закрытой ёмкости в сухом месте, защищённом от яркого света.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно обнаруживаются на коже, в кожных железах и на слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительные виды, в частности Staphylococcus aureus, являются известными условно-патогенными микроорганизмами человека.

Способность свёртывать плазму остаётся наиболее широко применяемым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями. Стафилококки обладают способностью расти на средах с высоким содержанием соли. Выделение коагулазоположительных стафилококков на агаре с маннитом и феноловым красным, содержащем 7,5 % хлорида натрия, изучалось Чепменом.

Основа агара с маннитом и солью рекомендована для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов. Дополнительное свойство — липазную активность Staphylococcus aureus — можно выявлять после добавления эмульсии яичного желтка FD045. Липазная активность определяется по жёлтым непрозрачным зонам вокруг колоний.

Среда также используется для проведения испытаний на микробиологические пределы с целью селективного выделения стафилококков. Формула соответствует гармонизированным требованиям USP/EP/BP/JP/IP.

Пептон HM B, триптон и пептон обеспечивают среду питательными веществами, включая источники углерода и азотистых соединений, аминокислоты с длинной цепью, витамины, другие необходимые факторы роста и микроэлементы. Многие бактерии, за исключением стафилококков, подавляются хлоридом натрия в концентрации 7,5 %.

Маннит является сбраживаемым углеводом. Его ферментация приводит к образованию кислоты, которая определяется индикатором феноловым красным.

Staphylococcus aureus сбраживает маннит и образует жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазонегативные штаммы Staphylococcus aureus обычно не сбраживают маннит, поэтому образуют колонии от розового до красного цвета, окружённые зонами от красного до пурпурного цвета.

Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии Staphylococcus aureus необходимо подтверждать постановкой коагулазного теста в пробирочном или предметно-стекольном варианте. Липазную активность Staphylococcus aureus определяют после добавления эмульсии яичного желтка.

Предполагаемый Staphylococcus aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом. Кроме того, микроорганизм следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избыток соли, чтобы исключить возможное влияние соли на коагулазный тест или другие диагностические исследования, например на питательный бульон M002.

Некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут демонстрировать задержанную ферментацию маннита. Поэтому отрицательные результаты перед отбраковкой следует повторно инкубировать ещё 24 ч.

Сбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов необходимо использовать соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами USP/EP/BP/JP/IP.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда является селективной; некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут демонстрировать задержанную ферментацию маннита.
2. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут показывать вариабельные характеры роста на этой среде.
3. Каждая серия среды испытана на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При работе с конкретным микроорганизмом, не указанным в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований исследования.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

pH: 7,20–7,60.

Испытание стимулирования роста

Испытание стимулирования роста выполняют в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Коэффициент восстановления принимают равным 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным на испытанной и утверждённой серии среды, должен наблюдаться при заданной температуре не позднее минимального периода времени, установленного методикой, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Колонии должны быть сопоставимы по внешнему виду и индикаторной реакции с колониями,