Питательная микробиологическая среда HiMedia MH118-2.5KG Агар с маннитом и солью производства HiMedia с содержанием хлорида натрия 75,000 г/л. Среда предназначена для селективного выделения стафилококков из фармацевтических образцов; хранение сухой среды осуществляется при 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения стафилококков из фармацевтических продуктов при проведении испытания на микробиологические пределы по гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Основное назначение: агаровая селективная среда для выделения стафилококков из фармацевтических образцов.

Тип образца: фармацевтические образцы.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Пептический гидролизат тканей животного происхождения

Панкреатический гидролизат казеина

Эквивалент мясного экстракта

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 111,02 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов, ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин или в соответствии с валидированным циклом стерилизации.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Среда содержит 7,5 % хлорида натрия. При многократном контакте с воздухом и поглощении влаги хлорид натрия может образовывать комки, поэтому порошок следует хранить в плотно закрытой ёмкости, в сухом месте и вдали от яркого света.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно обнаруживаются на коже, в кожных железах и на слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительный вид Staphylococcus aureus является известным условно-патогенным микроорганизмом человека. Способность свёртывать плазму остаётся наиболее широко применяемым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями.

Стафилококки обладают способностью расти на средах с высоким содержанием соли. Выделение коагулазоположительных стафилококков на фенол-красном маннитном агаре с добавлением 7,5 % NaCl изучалось Чепменом. Полученная основа агара с маннитом и солью рекомендована для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов.

Дополнительное свойство Staphylococcus aureus — липазную активность — можно выявлять при добавлении эмульсии яичного желтка FD045. Липазная активность визуализируется в виде жёлтых непрозрачных зон вокруг колоний. Среда также применяется при проведении испытаний на микробиологические пределы для селективного выделения стафилококков. Рецептура соответствует гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Пептон HM B, триптон и пептон обеспечивают среду питательными веществами: источниками углерода и азотистых соединений, аминокислотами с длинной цепью, витаминами, другими необходимыми факторами роста и микроэлементами. Высокая концентрация хлорида натрия — 7,5 % — подавляет рост многих бактерий, кроме стафилококков. Маннит является сбраживаемым углеводом; его ферментация приводит к образованию кислоты, которая выявляется индикатором феноловым красным.

Staphylococcus aureus ферментирует маннит, образуя жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазоотрицательные штаммы S. aureus обычно не ферментируют маннит, поэтому формируют колонии от розового до красного цвета, окружённые красно-фиолетовыми зонами. Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S. aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом в пробирочном или предметно-стекольном варианте.

Липазную активность S. aureus выявляют добавлением эмульсии яичного желтка.

Предположительно обнаруженный S. aureus необходимо подтвердить коагулазным тестом. Микроорганизм также следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избытка соли, чтобы исключить возможное влияние соли на коагулазный тест или другие диагностические исследования, например на питательный бульон M002.

Некоторые штаммы S. aureus могут демонстрировать замедленную ферментацию маннита. Поэтому отрицательные результаты перед отбраковкой следует повторно инкубировать ещё 24 ч.

Сбор и обработка образцов

Для фармацевтических образцов следует применять соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда является селективной; некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут демонстрировать замедленную ферментацию маннита.
2. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к росту и могут показывать различающиеся характеристики роста на среде.
3. Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
4. Отрицательные результаты для S. aureus следует учитывать с осторожностью из-за возможной задержки ферментации маннита; перед отбраковкой требуется дополнительная инкубация в течение 24 ч.
5. Для коагулазного тестирования и других диагностических исследований рекомендуется использовать среду без избытка соли, поскольку соль может влиять на результаты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный свободно текучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Приготовленная среда: красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель, формирующийся в чашках Петри.

Водородный показатель

pH: 7,20–7,60.

Испытание стимулирования роста

Испытание стимулирования роста выполнено в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Степень восстановления принимается равной 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным на проверенной и одобренной серии среды, должен наблюдаться при заданной температуре не позднее кратчайшего установленного времени при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C не более 18 ч.

Индикаторные свойства

Колонии должны быть сопоставимы по внешнему виду и индикаторной реакции с колониями, ранее полученными на проверенной и одобренной серии среды, при заданной температуре в течение периода, соответствующего установленному диапазону, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестируемого микроорганизма не должен наблюдаться при заданной температуре в течение периода не менее максимального установленного времени при посевной дозе ≥100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C не менее 72 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Значение восстановления серии (КОЕ) | Восстановление | Цвет колонии | Температура и время инкуба