Питательная микробиологическая среда HiMedia MH118-100G Агар с маннитом и солью предназначена для селективного выделения стафилококков из фармацевтических образцов. Среда используется в микробиологических испытаниях на микробиологическую чистоту и содержит 7,5 % хлорида натрия, подавляющего рост многих бактерий, кроме стафилококков.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения стафилококков из фармацевтических продуктов при проведении испытаний на микробиологическую чистоту по гармонизированной методике фармакопей USP/EP/BP/JP/IP.

• Тип продукта: агаровая питательная среда
• Назначение: селективное выделение стафилококков
• Тип образца: фармацевтические образцы
• Масса упаковки: 100 г
• Температура хранения: 10–30 °C

Состав

Формула на 1 л среды:

Пептический перевар тканей животного происхождения

Панкреатический перевар казеина

Эквивалент мясного экстракта

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 111,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин либо по валидированному циклу стерилизации.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Особенности хранения сухой среды

Продукт содержит 7,5 % хлорида натрия. При многократном контакте с воздухом и поглощении влаги хлорид натрия может образовывать комки. Храните продукт в плотно закрытой ёмкости, в сухом месте, защищённом от яркого света.

Принцип действия и интерпретация

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно обнаруживаются на коже, кожных железах и слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительные виды, в частности Staphylococcus aureus, являются документированными условно-патогенными микроорганизмами человека.

Способность свёртывать плазму остаётся наиболее широко используемым и общепринятым критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями. Стафилококки обладают характерной способностью расти на средах с высоким содержанием соли. Выделение коагулазоположительных стафилококков на агаре с маннитом и феноловым красным, дополненном 7,5 % NaCl, было исследовано Чапменом.

Маннитно-солевой агар рекомендован для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов. Липазную активность Staphylococcus aureus можно выявлять после добавления эмульсии яичного желтка FD045: липазная активность проявляется в виде жёлтых непрозрачных зон вокруг колоний.

Среда также используется при проведении испытаний на микробиологическую чистоту для селективного выделения стафилококков. Рецептура соответствует гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Пептон HM B, триптон и пептон обеспечивают питательность среды, являясь источниками углерода, азотистых соединений, аминокислот с длинной цепью, витаминов, других необходимых факторов роста и микроэлементов. Многие бактерии, кроме стафилококков, ингибируются хлоридом натрия в концентрации 7,5 %.

Маннит является ферментируемым углеводом. Его сбраживание приводит к образованию кислоты, которая выявляется индикатором феноловым красным.

Штаммы S. aureus, сбраживающие маннит, образуют жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазоотрицательные штаммы S. aureus обычно не сбраживают маннит, поэтому формируют колонии от розового до красного цвета, окружённые красно-фиолетовыми зонами.

Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S. aureus необходимо подтверждать постановкой коагулазного теста в пробирке или на предметном стекле. Липазную активность S. aureus можно выявлять добавлением эмульсии яичного желтка.

Возможное наличие S. aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом. Кроме того, микроорганизм следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избытка соли, чтобы исключить возможное влияние соли на коагулазный тест и другие диагностические исследования, например на питательный бульон M002.

Некоторые штаммы S. aureus могут демонстрировать замедленное сбраживание маннита. Поэтому отрицательные результаты следует инкубировать дополнительно 24 ч перед окончательным отбраковыванием.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Значение pH

7,20–7,60.

Испытание ростовых свойств

Испытание ростовых свойств выполняют в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч. Степень восстановления принимают за 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростовые свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным на испытанной и одобренной серии среды, должен наблюдаться при заданной температуре не позднее минимального установленного времени после внесения посевной дозы ≤100 КОЕ: при 30–35 °C в течение ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Внешний вид колоний и характер индикаторной реакции должны быть сопоставимы с ранее полученными на испытанной и одобренной серии среды при заданной температуре в течение периода, установленного методикой, после внесения посевной дозы ≤100 КОЕ: при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестового микроорганизма не должен наблюдаться при заданной температуре в течение не менее максимального установленного времени после внесения посевной дозы ≥100 КОЕ: при 30–35 °C в течение ≥72 ч.