HiMedia MH031-5KG Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia MH031-5KG Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар производства HiMedia предназначена для селективного выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Среда применяется при контроле микробиологических пределов фармацевтических образцов; температура хранения составляет 10–30 °C.

Назначение и область применения

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар HiMedia MH031-5KG рекомендуется как селективная среда для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella из фармацевтических продуктов.

Среда применяется для микробиологического контроля фармацевтических и нестерильных продуктов, включая выявление или подтверждение отсутствия Salmonella после предварительного обогащения в бульоне Раппапорта—Вассилиадиса для обогащения Salmonella (MH1491), в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP.

Основной тип образца: фармацевтические образцы.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,8 г сухой обезвоженной среды, что соответствует массе среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до кипения среды.
3. Не нагревайте среду в автоклаве.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню с температурой 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды: для них требуется более продолжительное нагревание, что может привести к образованию осадка.

В среде может образовываться небольшой осадок. Это свойство среды не влияет на её рабочие характеристики.

Принцип действия и интерпретация

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих палочек, включающее более 100 видов бактерий, которые обычно обитают в кишечнике человека и животных. Представители нормальной кишечной микрофлоры относятся к колиформным бактериям. Клинически значимые роды семейства Enterobacteriaceae включают Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia (1).

Salmonella являются наиболее сложной группой среди представителей Enterobacteriaceae. Инфицирование человека бактериями рода Salmonella чаще всего происходит при употреблении пищи, воды или молока, загрязнённых выделениями человека или животных (2).

Для селективного выделения и идентификации кишечных палочек, включая Salmonella, разработано большое количество питательных сред. Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар — селективная и дифференциальная среда, разработанная Taylor (3–7) для выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала. Среда также применяется при фармацевтических испытаниях и контроле нестерильных продуктов для выявления или подтверждения отсутствия Salmonella после обогащения в бульоне Раппапорта—Вассилиадиса для обогащения Salmonella (MH1491), в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP (8–12).

Селективные и дифференциальные компоненты

Дезоксихолат натрия, цитрат аммония железа и тиосульфат натрия являются селективными компонентами, подавляющими рост грамположительных микроорганизмов. Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами и факторами роста.

Ксилоза, сахароза и лактоза являются сбраживаемыми сахарами среды. Ксилозу сбраживает почти большинство кишечных бактерий, за исключением Shigella, что позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella. Бактерии рода Salmonella метаболизируют ксилозу и декарбоксилируют лизин, в результате чего pH изменяется в щелочную сторону и формируется реакция, имитирующая реакцию Shigella. Чтобы предотвратить такую реакцию у лизин-положительных колиформных бактерий, лактозу и сахарозу добавляют в избытке: их сбраживание приводит к образованию кислоты, поэтому непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин.

Тиосульфат натрия способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении. Он также служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющего тиосульфат с образованием H₂S. Тиосульфат натрия и цитрат аммония железа являются индикаторами образования H₂S в среде.

Тиосульфат натрия также инактивирует галогены, ртутьсодержащие соединения и альдегиды, снижая их токсичность в исследуемом образце, если такие вещества присутствуют при проведении микробиологических испытаний на соответствие микробиологическим пределам. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие в среде. Феноловый красный является индикатором pH.

Изменение окраски и интерпретация роста

Сбраживание сахаров происходит одновременно и сопровождается образованием кислот. В результате индикатор pH приобретает различные оттенки, а цвет колоний и среды при длительной инкубации изменяется с красного на жёлтый.

Образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами в щелочных условиях. Кислотообразование при сбраживании углеводов может подавлять образование H₂S. Щелочные условия вызывают обратное изменение цвета среды на красный.

Среда предназначена для скрининга образцов со смешанной кишечной микрофлорой: обильный рост других видов не препятствует выявлению Salmonella и Shigella.

Сбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам (8–12).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Отдельные микроорганизмы имеют разные требования к условиям роста и могут демонстрировать на среде различную интенсивность и характер роста.
• Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При работе с конкретным микроорганизмом, не указанным в COA, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований проводимого исследования.
• В среде может образовываться небольшой осадок. Это свойство среды не влияет на её рабочие характеристики.
• Некоторые штаммы Proteus могут придавать большинству колоний окраску от красной до жёлтой, при этом у большинства колоний образуются чёрные центры, что приводит к ложноположительным реакциям.
• Нэнтеробактерии, например Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
• S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные колонии без H₂S, внешне напоминающие виды Shigella.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид сухой среды: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

pH

pH: 7,20–7,60.

Ростовые характеристики

Стимуляцию роста проводят в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP. Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение установленного времени. Степень восстановления принимают за 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизма должен быть сопоставим с ростом, ранее полученным на проверенной и утверждённой серии среды, при установленной температуре и в течение периода, не превышающего минимальное заданное время, при посевной дозе ≤100 КОЕ: 30–35 °C, ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Внешний вид колоний и индикаторная реакция должны быть сопоставимы с результатами, ранее полученными на проверенной и утверждённой серии среды, при установленной температуре в течение периода времени, находящегося в заданном диапазоне, при посевной дозе ≤100 КОЕ: 30–35 °C, 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестируем