Ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар HiMedia MH031-500G (уп/500 гр)

Селективно-дифференциальная питательная среда Ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар HiMedia MH031-500G (уп/500 гр) представляет собой сухой агар для микробиологического анализа фармацевтических образцов. Среда предназначена для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella после этапа обогащения; приготовление выполняют нагреванием без автоклавирования.

Назначение и область применения

Ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар применяется как селективная и дифференциальная среда для выделения и идентификации кишечных патогенов, прежде всего Salmonella и Shigella, из фармацевтических образцов.

Основное назначение:

• выделение и количественное определение Salmonella Typhi и других видов Salmonella из фармацевтических препаратов;
• микробиологическое испытание фармацевтических и нестерильных продуктов;
• выявление или подтверждение отсутствия Salmonella после предварительного обогащения в бульоне для обогащения Salmonella Раппапорта—Вассилиадиса MH1491;
• скрининг образцов со смешанной кишечной микрофлорой.

Методика применения среды соответствует гармонизированному подходу, используемому в испытаниях по USP/EP/BP/JP/IP. Формула среды соответствует составу агаровой среды K Европейской фармакопеи.

Состав

Расход компонентов приведён в граммах на литр.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Технические характеристики

• Наименование среды: ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар
• Артикул: MH031-500G
• Форма выпуска: сухой свободносыпучий порошок
• Масса упаковки: 500 г
• Эквивалентная масса обезвоженной среды: 54,8 г/л
• Тип среды: селективная и дифференциальная
• Назначение изделия: агар
• Тип образца: фармацевтические образцы
• pH после нагревания при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Рабочий диапазон pH по контролю качества: 7,20–7,60
• Условия инкубации для оценки культуральных характеристик: 30–35 °C, 18–48 ч
• Условия хранения сухой среды: 10–30 °C, в плотно закрытой ёмкости
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Рекомендуемые условия хранения готовых чашек для повышения стабильности характеристик: 2–8 °C
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 54,8 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до закипания среды.
3. Не нагревайте среду в автоклаве.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню с температурой 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.
6. Не рекомендуется готовить большие объёмы среды: продолжительный нагрев может привести к образованию осадка.

В среде возможно небольшое выпадение осадка. Это свойство состава, которое не влияет на рабочие характеристики среды.

Принцип действия и интерпретация

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих палочек, включающее более 100 видов бактерий, обычно обитающих в кишечнике человека и животных. Представителей нормальной кишечной микрофлоры относят к колиформным бактериям. К клинически значимым родам семейства Enterobacteriaceae относятся Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.

Salmonella относятся к наиболее сложным для дифференциации представителям семейства Enterobacteriaceae. Инфицирование человека Salmonella чаще всего связано с употреблением пищи, воды или молока, загрязнённых экскрементами человека или животных.

Ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар сочетает селективные и дифференциальные свойства. Среда была разработана Тейлором для выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала; также применяется при фармацевтическом контроле и испытаниях нестерильных продуктов для выявления Salmonella после обогащения в бульоне MH1491.

Механизм действия компонентов:

• дезоксихолат натрия, цитрат аммонийного железа и тиосульфат натрия подавляют рост грамположительных микроорганизмов;
• дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы основными питательными веществами и факторами роста;
• ксилоза, сахароза и лактоза являются сбраживаемыми сахарами среды;
• почти все кишечные бактерии, за исключением Shigella, сбраживают ксилозу, что позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella;
• Salmonella метаболизируют ксилозу и декарбоксилируют лизин, в результате чего pH смещается в щелочную сторону и формируется реакция, сходная с реакцией Shigella;
• для предотвращения аналогичной реакции у лизинположительных колиформных бактерий в среду добавлены повышенные количества лактозы и сахарозы. Образование кислоты препятствует декарбоксилированию лизина у непатогенных продуцентов H₂S;
• тиосульфат натрия участвует в реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении;
• тиосульфат натрия является субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей его с образованием H₂S;
• тиосульфат натрия и цитрат аммонийного железа служат индикаторами образования H₂S;
• тиосульфат натрия также инактивирует галогены, ртутные соединения и альдегиды, снижая их токсичность в исследуемой пробе, если они присутствуют при микробиологических испытаниях;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды;
• феноловый красный используется как индикатор pH.

Сбраживание сахаров протекает одновременно и сопровождается образованием кислот. Это вызывает изменение окраски индикатора, колоний и среды с красной на жёлтую при длительной инкубации. Образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами в щелочной среде; образование кислот при сбраживании углеводов может подавлять эту реакцию. Щелочная реакция возвращает окраску среды к красной.

Среда позволяет выявлять Salmonella и Shigella даже при обильном росте других видов, поэтому подходит для скрининга образцов со смешанной кишечной микрофлорой.

Образцы и обращение с ними

Тип исследуемого образца

Фармацевтические образцы.

Сбор и обработка образцов

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим методическим указаниям.

После завершения работы загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Требования безопасности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами выполняйте стандартные меры предосторожности согласно установленным методическим указаниям.
• Требования безопасности уточняйте в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют неодинаковые требования к условиям роста и могут демонстрировать различающиеся варианты роста на среде.
• Каждая партия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При необходимости выявления микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа, пользователь должен валидировать среду с учётом конкретной задачи.
• В среде возможно небольшое выпадение осадка; это свойство состава не влияет