HiMedia MH031-2.5KG Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар

Питательная агаровая среда HiMedia MH031-2.5KG Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар — сухая селективно-дифференциальная среда для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Среда предназначена для микробиологического контроля фармацевтических образцов; масса упаковки составляет 2,5 кг, хранение — при 10–30 °C.

Назначение

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар рекомендуется как селективная среда для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella из фармацевтических продуктов при микробиологическом испытании на соответствие гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Среда также применяется для фармацевтических испытаний и контроля нестерильных продуктов при обнаружении или подтверждении отсутствия Salmonella после обогащения в бульоне Раппапорта—Вассилиадиса для обогащения Salmonella MH1491 в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP.

Тип образца

Фармацевтические образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,8 г сухой обезвоженной среды — эквивалентное количество на 1 л — в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до закипания среды.
3. Не нагревайте среду в автоклаве.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню с температурой 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды: для них требуется более длительный нагрев, который может привести к образованию осадка.

В среде может появляться небольшой осадок. Это свойство среды, не влияющее на её рабочие характеристики.

Принцип действия и интерпретация

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих бацилл, включающее более 100 видов бактерий, обычно обитающих в кишечнике человека и животных. Представители нормальной кишечной микрофлоры относятся к колиформным бактериям. Клинически значимые роды семейства Enterobacteriaceae включают Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.

Salmonella относятся к наиболее сложным представителям семейства Enterobacteriaceae. Инфекции человека, вызываемые Salmonella, чаще всего связаны с употреблением пищи, воды или молока, загрязнённых экскрементами человека или животных.

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар представляет собой селективную и дифференциальную среду, разработанную Taylor для выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала. Среда также используется при фармацевтических испытаниях и контроле нестерильных продуктов для обнаружения или подтверждения отсутствия Salmonella после предварительного обогащения в бульоне Раппапорта—Вассилиадиса для обогащения Salmonella MH1491 в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP.

Дезоксихолат натрия, аммонийно-железный цитрат и тиосульфат натрия являются селективными компонентами, подавляющими рост грамположительных микроорганизмов. Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами и факторами роста.

Ксилоза, сахароза и лактоза являются сбраживаемыми сахарами среды. Почти все кишечные бактерии, за исключением Shigella, сбраживают ксилозу, что позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella. Salmonella метаболизируют ксилозу и декарбоксилируют лизин, в результате чего pH повышается и реакция становится щелочной, имитируя реакцию Shigella. Для предотвращения такой реакции у лизин-положительных колиформных бактерий в среду в избытке добавлены лактоза и сахароза: их сбраживание приводит к образованию кислоты, поэтому непатогенные бактерии, продуцирующие H₂S, не декарбоксилируют лизин.

Тиосульфат натрия способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высыхание при хранении. Он также служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей тиосульфат с образованием H₂S. Тиосульфат и аммонийно-железный цитрат выполняют функцию индикаторов H₂S. Тиосульфат натрия также инактивирует галогены, ртутьорганические соединения и альдегиды, что позволяет снизить их токсичность в исследуемом образце при микробиологических испытаниях предельного содержания. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Феноловый красный является индикатором pH.

Сбраживание сахаров протекает одновременно с их деградацией и сопровождается образованием кислот. Это вызывает изменение оттенков индикатора и окраски колоний и среды с красной на жёлтую при длительной инкубации. Образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами в щелочных условиях; образование кислоты при сбраживании углеводов может подавлять эту реакцию. Щелочные условия вызывают обратное изменение окраски среды на красную.

Среда предназначена для скрининга образцов со смешанной кишечной микрофлорой: рост Salmonella и Shigella остаётся различимым даже при обильном росте других видов микроорганизмов.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Тип продукта: агаровая питательная среда
• Форма выпуска: сухой свободнотекучий порошок
• Масса: 2,5 кг
• Рабочий pH после нагревания при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• pH приготовленной среды: 7,20–7,60
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Рекомендуемая температура хранения чашек с приготовленной средой: 2–8 °C
• Температура переноса на водяную баню после нагревания: 50 °C
• Автоклавирование при приготовлении: не допускается

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный свободнотекучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

pH

7,20–7,60.

Культуральная реакция

Стимуляцию роста проводят в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP. Культуральную реакцию наблюдали после инкубации при 30–35 °C в течение указанного времени. Коэффициент восстановления принимают равным 100 % относительно роста бактерий на соево-казеиновом агаре с переваренным казеином.

Ростовые свойства

Рост микроорган