HiMedia MH031-100G Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар

Питательная агаровая среда HiMedia MH031-100G Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар предназначена для селективного выделения и количественного определения бактерий рода Salmonella из фармацевтических образцов при температуре хранения 10–30 °C. Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар применяют для дифференциального выявления Salmonella и Shigella после этапа обогащения, при этом среда не предназначена для автоклавирования.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для селективного выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов рода Salmonella из фармацевтических препаратов в рамках испытаний на микробиологические пределы по гармонизированной методике USP, EP, BP, JP и IP.

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар используют для:

• выделения и идентификации кишечных патогенов, прежде всего Salmonella и Shigella;
• анализа фармацевтических образцов и нестерильной продукции;
• определения наличия или отсутствия Salmonella после предварительного обогащения в бульоне для обогащения Salmonella по Раппапорту—Вассилиадису MH1491;
• скрининга образцов со смешанной кишечной микрофлорой;
• контроля роста целевых и ингибируемых микроорганизмов.

Тип образца

Фармацевтические образцы.

Состав

Состав обезвоженной среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия показателям эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,8 г сухой среды, что соответствует количеству обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до кипения среды.
3. Не нагревайте среду в автоклаве.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню при 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды: они требуют более длительного нагревания, что может привести к образованию осадка.

Небольшое выпадение осадка в среде возможно и является свойством состава; оно не влияет на рабочие характеристики среды.

Принцип действия и интерпретация

Enterobacteriaceae — семейство грамотрицательных неспорообразующих палочек, включающее более 100 видов бактерий, обычно обитающих в кишечнике человека и животных. Представителей нормальной кишечной микрофлоры относят к колиформным бактериям. К клинически значимым родам семейства Enterobacteriaceae относятся Cedecea, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Ewingella, Hafnia, Klebsiella, Kluyvera, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.

Salmonella представляет одну из наиболее сложных групп семейства Enterobacteriaceae. Инфекции человека, вызываемые Salmonella, чаще всего возникают при употреблении пищи, воды или молока, загрязнённых человеческими либо животными экскрементами.

Ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар — селективная и дифференциальная среда, разработанная Тейлором для выделения и идентификации кишечных патогенов, особенно Shigella, из образцов кала. Среду также применяют при испытаниях фармацевтической продукции и нестерильных продуктов для выявления наличия или отсутствия Salmonella после обогащения в бульоне для обогащения Salmonella по Раппапорту—Вассилиадису MH1491 в соответствии с гармонизированной методикой USP, EP, BP, JP и IP.

Роль компонентов среды

• Дезоксихолат натрия, цитрат аммония железа и тиосульфат натрия действуют как селективные агенты, ингибирующие грамположительные микроорганизмы.
• Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами и факторами роста.
• Ксилоза, сахароза и лактоза являются ферментируемыми сахарами среды.
• Ксилозу ферментируют почти все кишечные бактерии, кроме Shigella. Это позволяет дифференцировать Shigella и Salmonella.
• Salmonella метаболизирует ксилозу и декарбоксилирует лизин, изменяя pH в щелочную сторону и имитируя реакцию Shigella.
• Для предотвращения аналогичной реакции у лизин-положительных колиформных бактерий лактозу и сахарозу добавляют в избытке. Образующаяся кислота препятствует декарбоксилированию лизина у непатогенных продуцентов H₂S.
• Тиосульфат натрия способствует реактивации серосодержащих соединений и предотвращает их высушивание при хранении.
• Тиосульфат натрия служит субстратом для фермента тиосульфатредуктазы, расщепляющей его с образованием H₂S.
• Тиосульфат натрия и цитрат аммония железа являются индикаторами образования H₂S.
• Тиосульфат натрия также инактивирует галогены, ртутьорганические соединения и альдегиды, снижая их возможную токсичность в исследуемом образце при испытаниях на микробиологические пределы.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды.
• Феноловый красный используется как индикатор pH.

Ферментация сахаров протекает одновременно с их деградацией и сопровождается образованием кислот. Это вызывает изменение оттенка индикатора и переход окраски колоний и среды с красной на жёлтую при длительной инкубации.

Образование сероводорода приводит к появлению колоний с чёрными центрами в щелочной среде. Кислоты, образующиеся при ферментации углеводов, могут подавлять образование H₂S. Щелочная реакция возвращает окраску среды к красной.

Среда предназначена для скрининга образцов, содержащих смешанную кишечную микрофлору: обильный рост других видов не маскирует восстановление Salmonella и Shigella.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Отдельные микроорганизмы отличаются требованиями к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые характер роста на среде.
• Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При работе с микроорганизмами, не указанными в COA, рекомендуется валидировать среду с учётом конкретных требований пользователя.
• Возможно небольшое выпадение осадка; это свойство среды не влияет на её эффективность.
• Некоторые штаммы Proteus могут давать окраску от красной до жёлтой, при этом у большинства колоний формируются чёрные центры, что приводит к ложноположительным реакциям.
• Нетерминальные представители, например Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
• S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные колонии без H₂S, напоминая виды Shigella.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

pH

7,20–7,60.

Условия оценки культуральных свойств

Оценку способности среды стимулировать рост проводят в соответствии с гармонизированной методикой USP, EP, BP, JP и IP. Культуральные свойства оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение установленного времени.

Коэффициент восстановления принимают равным 100 % для роста бактерий на соево-казеиновой агаровой среде.

Ростостимулирующие свойства

Рост микроорганизмов, сопоставимый с ростом, ранее полученным на протестированной и одобренной партии среды, должен наблюдаться при установленной температуре в течение периода, не превышающего минимальное указанное время, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C не более 18 ч.

Индикаторные свойства

Внешний вид колоний и индикаторная реакция должны быть сопоставимы с результатами, ранее полученными на протестированной и одобренной партии среды, при установленной температуре в течение времени в заданном диапазоне, при посевной дозе ≤100 КОЕ и инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч