Основа агара Хейфлика HiMedia ME1886-500G (уп/500 гр)

Основа агара Хейфлика HiMedia ME1886-500G (уп/500 гр) — сухая питательная среда производства HiMedia для обнаружения микоплазм в фармацевтических продуктах, вакцинах, банках клеток и вирусных культурах. Состав разработан в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи (EP) и Фармакопеи США (USP).

Принцип измерения

Среда предназначена для выделения микоплазм — группы мелких бактерий, лишенных клеточных стенок (класс Mollicutes). Эти микроорганизмы могут вызвать серьезное загрязнение культур клеток и тканей, а также фильтрованных стерилизованных бульонов из казеина и сои. Присутствие микоплазм не всегда сопровождается помутнением культуры или видимыми изменениями клеток, что делает необходимым использование специализированных сред.

В составе среды:

• BI Broth (содержит порошок инфузии сердца и пептон): обеспечивает азот, витамины, аминокислоты и источники углерода.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс.
• Экстракт дрожжей: служит богатым источником никотинамидадениндинуклеотида (NAD), необходимого для роста M. synoviae.
• ДНК: обеспечивает дополнительные питательные вещества.
• Феноловый красный: индикатор, сигнализирующий о росте микоплазм при изменении цвета среды с красного на желтый или пурпурный.
• Агар: отвердитель.
• Конский сыворотка (добавляется отдельно): предоставляет липидные компоненты и факторы роста.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26,32 г основы в 416 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут или согласно валидированному циклу.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 5 мл восстановленного содержимого одной ампулы добавки Hayflick Supplement (FD300).
6. Асептически добавьте 79 мл не нагретой конской сыворотки (RM1239).
7. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Процедура исследования

Для обнаружения микоплазм рекомендуется периодический пересев роста, полученного в жидкой среде Hayflick Broth (ME1885), на твердую среду Hayflick Agar (ME1886):

1. Внесите 10 мл исследуемого продукта в 100 мл бульона Hayflick (ME1885).
2. Инкубируйте субкультуры в течение 7 дней в микроаэрофильных условиях при 35–37 °C.
3. На 2–4, 6–8, 13–15 и 19–21 дни после инокуляции выполняйте пересев жидкой среды на одну чашку каждого типа агара Хейфлика (ME1886) с последующей инкубацией в течение 7 дней (микроаэрофильные условия, 35–37 °C).
4. Дополнительно внесите 0,2 мл исследуемого продукта непосредственно на агар Хейфлика (ME1886) и инкубируйте не менее 14 дней при 35–37 °C в условиях достаточной влажности и микроаэрофильной атмосферы (5–10 % $\text{CO}_2$).
5. Обязательно используйте положительный и отрицательный контроли.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности. Эквивалентно бульону на инфузии сердец телят.

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от светло-желтого до розового цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: оранжево-розовый прозрачный или слегка опалесцирующий гель (после добавления FD300 и RM1239).
• Реакция: pH 7,8 $\pm$ 0,2 для 5,26 % (масс./об.) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,60–8,00.

Культуральные характеристики

Характеристики определены при использовании стерильной добавки (FD300) и конской сыворотки (RM1239) в атмосфере с 10 % $\text{CO}_2$ после инкубации при 35–37 °C в течение $\ge$14 дней.

Условия эксплуатации и ограничения

Ограничения применения

• Инкубация должна проводиться в атмосфере с содержанием $\text{CO}_2$ 5–10 %.
• Первичный осмотр проводится через 48 часов, однако среду нельзя считать отрицательной до истечения трех недель инкубации.
• Для подтверждения результатов необходимо проведение дополнительных биохимических тестов.
• M. synoviae не растет на бульоне Хейфлика из-за потребности в NAD.
• M. hyorhinis ATCC 29052 не растет на данной среде.

Хранение и обслуживание

• Хранить сухую среду в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Готовую среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Область применения

Применяется в фармацевтических лабораториях и центрах контроля качества для верификации чистоты биотехнологических продуктов, вакцин и клеточных линий. Требует соблюдения стандартных правил микробиологической безопасности и использования средств индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).