Основа бульона Хейфлика HiMedia ME1885-500G (уп/500 гр)

Сухая основа бульона Хейфлика HiMedia ME1885-500G для обнаружения микоплазм в фармацевтических продуктах, вакцинах, банках клеток и культурах вирусов. Состав разработан в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи (EP) и Фармакопеи США (USP); конечный pH среды составляет 7,8 ± 0,2.

Принцип измерения

Бульон Хейфлика предназначен для общего обнаружения микоплазм — группы мельчайших бактерий класса Mollicutes, лишенных клеточной стенки. Эти микроорганизмы способны вызывать серьезное загрязнение культур клеток и тканей, а также стерилизованных фильтрацией бульонов соево-казеинового переваривания. Инфицирование клеток может привести к изменению метаболических путей, фенотипических характеристик и нормального роста клеток.

В составе среды:

• BI Broth (включает порошок инфузии сердца говяжьего и пептон): источники азота, витаминов, аминокислот и углерода.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс.
• Экстракт дрожжей: богатый источник никотинамидадениндинуклеотида (NAD), необходимого для роста M. synoviae.
• ДНК: дополнительные питательные вещества.
• Конский сыворотка (добавляется отдельно): обеспечивает липидные компоненты и факторы роста.
• Феноловый красный: индикатор, сигнализирующий о росте микоплазм при изменении цвета среды с красного на желтый или пурпурный.
• Пенициллин (добавляется отдельно): подавляет рост нежелательной флоры.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворить 18,82 г порошка в 416 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут или согласно валидированному циклу.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Добавить 5 мл восстановленного содержимого одного флакона добавки Хейфлика (Hayflick Supplement FD300).
6. Асептически добавить 79 мл не нагретой конской сыворотки (Horse serum RM1239).
7. Тщательно перемешать и разлить по стерильным пробиркам или иным подходящим емкостям.

Процедура исследования

1. В 100 мл бульона Хейфлика инокулируют 10 мл исследуемого продукта.
2. Флаконы плотно закрывают и инкубируют при температуре 35–37 °C в течение 20–21 суток.
3. Контроль проводят каждые 2–3 дня; при изменении цвета среды делают пересев.
4. Пересевы инкубируют в течение 7 дней в микроаэрофильных условиях при 35–37 °C.
5. На 2–4, 6–8, 13–15 и 19–21 дни после инокуляции делают пересевы жидкой среды на одну пластину каждого типа агара Хейфлика (ME1886) с последующей инкубацией в течение 7 дней в микроаэрофильных условиях при 35–37 °C.
6. Дополнительно 0,2 мл продукта инокулируют непосредственно на агар Хейфлика (ME1886) и инкубируют не менее 14 дней при 35–37 °C в условиях достаточной влажности и микроаэрофилии (5–10 % CO₂).
7. Обязательно проводят постановку положительного и отрицательного контролей.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-желтого до розового цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: оранжево-розовый прозрачный раствор без осадка (после добавления добавки FD300 и конской сыворотки RM1239).
• Реакция: pH 7,8 ± 0,2 для 3,76 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,60–8,00.

Культуральные характеристики

Характеристики определены при использовании стерильной добавки (FD300) и конской сыворотки (RM1239) в атмосфере с 10 % углекислого газа (CO₂) после инкубации при 35–37 °C до 7 суток.

Ограничения и особенности применения

• Инкубация должна проводиться в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂.
• Первичный осмотр проводится через 48 часов, однако пробу нельзя считать отрицательной до истечения трех недель инкубации.
• Среда не поддерживает рост M. synoviae (из-за зависимости от NAD) и M. hyorhinis ATCC 29052.
• При тестировании линий клеток насекомых необходимо включать контрольный штамм Spiroplasma (например, S. citri ATCC 29747 или S. melliferum ATCC 29416), так как они более требовательны к питанию и требуют более низких температур инкубации.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Меры предосторожности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты, а также материалы, контактировавшие с образцами, подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.